Question

【題目】科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療．其技術流程如圖1：
（1）步驟①的技術名稱是 ．
（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有 ．
（3）步驟③中，需要構建含有干擾素基因的 ． 由于DNA復制時，子鏈只能由5′向3′方向延伸，故構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從圖2A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取作為引物．對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶的組合為或 ．
（4）將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用的方法．

Answer 1

【答案】
（1）細胞核
（2）ES細胞具有全能性
（3）基因表達載體；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ
（4）綠；抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有全能性．（3）步驟③是將目的基因導入ES細胞，該過程之前需要構建基因表達載體；DNA復制只能從5’到3’，因此構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發綠色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用抗原﹣抗體雜交法． 所以答案是：（1）細胞核；（2）ES細胞具有全能性；（3）基因表達載體；B和C；HindⅢ和PstⅠ；EcoRⅠ和PstⅠ；（4）綠；抗原﹣抗體雜交
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術和動物細胞核移植技術的相關知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術；動物體細胞核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新胚胎最終發育為動物個體才能正確解答此題．