Question

【題目】人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種糖蛋白，具有很高的藥用價值，可以通過生物工程大量生產。下圖為含htPA基因的表達載體。請回答下列相關問題：

(1)限制酶主要是從________中獲得，其特點是能夠識別DNA分子的_________，并在特定位點切割DNA。質粒DNA分子上有一個至多個限制酶切位點，其作用是______。

(2)構建基因組文庫是獲取目的基因的常用方法，與基因組文庫相比，cDNA文庫的基因數相對要少，原因是________。

(3)作為受體細胞的酵母茵缺失URA3基因，必須在含有尿嘧啶的培養基中才能存活，因此，圖示表達載體上的URA3基因可作為____，供鑒定和選擇；為了篩選出成功導入表達載體的酵母菌，所使用的培養基____（填“需要”“不需要”）添加尿嘧啶。

(4)若要在羊乳中獲得htPA，為了獲得轉基因母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行________。若在轉htPA基因羊的羊乳中檢測到____，說明目的基因成功表達。

Answer 1

【答案】原核生物（或微生物） 特定的（脫氧）核苷酸序列 供外源DNA片段（基因）插入 cDNA文庫只能收集到生物發育到某時期已發生轉錄的基因，（而基因組文庫能收集到全部基因） 標記基因 不需要 性別鑒定 htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

【解析】

1、DNA重組技術至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體。2、目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

3、該基因工程需要對羊的性別進行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進行移植。

（1）限制酶主要是從原核生物（或原核細胞）中分離純化出來的。每一種限制性酶可以識別特定的（脫氧）核苷酸序列。質粒DNA分子可用作載體，其上有一個至多個限制酶切位點，其作用是供外源DNA片段（基因）插入。

（2）cDNA文庫只能收集到生物發育到某時期已發生轉錄的基因，（而基因組文庫能收集到全部基因）故與基因組文庫相比，cDNA文庫的基因數相對要少。

（3）圖示表達載體上的URA3基因可作為標記基因，供鑒定和選擇；由于缺失URA3基因的酵母菌必須在含有尿嘧啶的培養基中才能存活，重組質粒中含有URA3基因，為了篩選出成功導入表達載體的酵母菌，即所使用的培養基不需要添加尿嘧啶，如果能存活，說明導入成功；如不能存活，說明沒有成功。

（4）只有母羊能分泌乳汁，為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定；若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達。