Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從人血漿中制備。圖一是以基因工程技術(shù)獲取重組 HSA 的兩條途徑，其中報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì) K 呈現(xiàn)藍(lán)色。圖二為相關(guān)限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，以及 HAS 基因兩側(cè)的核苷酸序列。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，我們常常用不同的限制酶去切割目的基因和運(yùn)載體來(lái)獲得不同的黏性末端，原因是_____。依據(jù)圖一和圖二分析，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)下列敘述錯(cuò)誤的是____

A．應(yīng)該使用酶 B 和酶 C 獲取 HSA 基因

B．應(yīng)該使用酶 A 和酶 B 切割 Ti 質(zhì)粒

C．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒含 1 個(gè)酶 A 的識(shí)別位點(diǎn)

D．成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒用酶 C 處理將得到 2 個(gè) DNA 片段

（2）PCR 技術(shù)應(yīng)用的原理是_____，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過(guò)程中，以從 生物材料中提取的 DNA 作為模板，利用_________尋找 HSA 基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。

（3）圖一過(guò)程①中需將植物細(xì)胞與_______________________混合后共同培養(yǎng)，旨在讓__________________整合到植物細(xì)胞染色體 DNA 上；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉(zhuǎn)接到含_____的培養(yǎng)基上篩 選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞。

（4）圖一③過(guò)程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，采用最多，也是最為有效的方法是_____。

（5）為檢測(cè) HSA 基因的表達(dá)情況，可提取受體細(xì)胞的_____，用抗血清 白蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和反向連接 C DNA（雙鏈）復(fù)制 引物 農(nóng)桿菌 T-DNA 無(wú)色物質(zhì)K 顯微注射技術(shù) 蛋白質(zhì)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟是：目的基因的獲取；基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣；目的基因的檢測(cè)與鑒定。

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，常用兩種不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，獲得不同的黏性末端，以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化和反向連接（或使目的基因定向連接到載體上）；

A、由圖中DNA序列和酶切位點(diǎn)序列可知應(yīng)使用酶B和酶C切割獲取HSA基因，A正確；
B、導(dǎo)入的目的基因時(shí)應(yīng)在T-DNA上，因此Ti質(zhì)粒應(yīng)用酶A和酶B切割，因?yàn)槊?/span>A和酶B切出的黏性末不能互補(bǔ)配對(duì)，可以將目的基因連接進(jìn)去，B正確；
C、據(jù)圖一圖二分析可知，成功建構(gòu)的重組質(zhì)粒上不再有酶A的識(shí)別位點(diǎn)，C錯(cuò)誤；
D、成功構(gòu)建的重組質(zhì)粒用酶C處理能得到2個(gè)DNA片段，應(yīng)是A-C，和C-A片段，D正確。
故選C。
（2）PCR技術(shù)應(yīng)用的原理是DNA（雙鏈）復(fù)制，在利用該技術(shù)獲取目的基因的過(guò)程中，以從生物材料中提取的DNA作為模板，利用引物尋找HSA基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增。
（3）圖一過(guò)程①中需將植物細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，利用農(nóng)桿菌的侵染特性，讓T-DNA整合到植物細(xì)胞染色體DNA上；除盡農(nóng)桿菌后，為了篩選出轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞，利用重組質(zhì)粒上的報(bào)告基因表達(dá)的產(chǎn)物能催化無(wú)色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色的特性，進(jìn)行篩選，故還須將植物細(xì)胞轉(zhuǎn)接到含無(wú)色物質(zhì)K的培養(yǎng)基上。
（4）圖一③過(guò)程中將目的基因?qū)�入綿羊受體細(xì)胞，通常采用較多的方法是顯微注射技術(shù)。
（5）為檢測(cè)HSA基因的表達(dá)情況，可利用抗原抗-體雜交技術(shù)，具體做法是：提取受體細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗血清白蛋白的抗體做雜交實(shí)驗(yàn)。