Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）菊花組織培養(yǎng)的部分過程如下圖：

（1）過程①利用_______（較高/較低）滲透壓，使原生質(zhì)體產(chǎn)量大幅度提高，但存活率卻因此而降低，分析降低的原因可能是______________。過程②細(xì)胞壁形成后，可逐漸__________滲透壓。

（2）幼苗莖段帶葉，就會帶有_______，也就有了分生組織，所以不通過________階段就可直接形成叢狀苗。過程③應(yīng)在______________（從具體功能角度）培養(yǎng)基中進(jìn)行，全過程對光照要求是________。

A.早期每天24h光照，后期每天24h黑暗

B.每天一定時長的光照

C.早期每天24h黑暗，后期每天24h光照

D.每天24h黑暗

（二）請回答下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因問題：

（1）利用圖示質(zhì)粒和目的基因培育轉(zhuǎn)基因醋化醋桿菌。圖中標(biāo)注了相關(guān)限制性核酸內(nèi)切酶的識別序列和酶切位點(diǎn)，其中酶切位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。

（1）利用圖示質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_____________兩種限制酶切割。若用Sau3AⅠ、BclⅠ與許多圖示質(zhì)粒混合，每個質(zhì)粒將會有1個或多個位點(diǎn)被切開，最多可能獲得_______種大小不同的DNA片段。在首次篩選轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的醋化醋桿菌時，可用________取0.1mL醋化醋桿菌懸液，涂布在添加了___________的培養(yǎng)基來篩選。配制該培養(yǎng)基時，通常加入_______來調(diào)節(jié)滲透壓。當(dāng)成功選出所需菌種進(jìn)行醋酸發(fā)酵時，發(fā)酵瓶中的醋化醋桿菌通常用鋸末或刨花等材料_________化。

（2）利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)（目的基因能1個或多個導(dǎo)入并整合到受體細(xì)胞染色體上）獲得抗蟲（E）除草劑（T）的大豆植株甲，若甲自交F1中抗蟲抗除草劑：抗蟲不抗除草劑：不抗蟲抗除草劑=11:4:1.則導(dǎo)入受體細(xì)胞的基因E和T分別至少有幾個？___________。

A.1、1 B.1、2 C.2、1 D.2、2

Answer 1

【答案】 較高 過度失水損傷/死亡 降低 腋芽/芽 愈傷組織/脫分化 發(fā)芽/生芽 B BamHⅠ、HindⅢ 7 移液器/移液管/取樣器 四環(huán)素 甘露醇 固定 C

【解析】試題分析：本題主要考查植物組織培養(yǎng)、基因工程和基因自由組合定律。要求學(xué)生熟知植物組織培養(yǎng)的過程、基因工程中限制酶的選擇以及基因自由組合定律的應(yīng)用。

（一）（1）過程①為菊花幼苗莖切斷得到原生質(zhì)體，可以利用較高的滲透壓，但滲透壓較高后，會導(dǎo)致細(xì)胞過度失水損傷/死亡，從而使原生質(zhì)體產(chǎn)量大幅度提高，但存活率卻因此而降低。因此過程②細(xì)胞壁形成后，可逐漸降低滲透壓。

（2）幼苗莖段帶葉，就會帶有腋芽/芽，也就有了分生組織，所以不通過愈傷組織階段就可直接形成叢狀苗。過程③應(yīng)在發(fā)芽培養(yǎng)基中進(jìn)行，全過程對光照要求是每天一定時長的光照。

（二）（1）質(zhì)粒若采用BclⅠ限制酶，會破壞全部的標(biāo)記基因。因此質(zhì)粒只能采用BamHⅠ、HindⅢ切割。能被BclⅠ識別的序列，也能被Sau3AⅠ識別，兩者切割后的末端一致。能被BamHⅠ識別的序列，也能被Sau3AⅠ識別，但兩者切割后的末端不一致。因此在質(zhì)粒中，Sau3AⅠ、BclⅠ存在三個酶切位點(diǎn)，若每個質(zhì)粒將會有1個或多個位點(diǎn)被切開，最多可能獲得7種大小不同的DNA片段，即三個位點(diǎn)全部切割，會有3種，其中兩個位點(diǎn)被切割，有3種，一個位點(diǎn)被切割，有1種。在首次篩選轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的醋化醋桿菌時，可用移液器取0.1mL醋化醋桿菌懸液，由于在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，破壞了氨芐親霉素抗性基因，因此應(yīng)將其涂布在添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基中篩選。配制該培養(yǎng)基時，通常加入甘露醇來調(diào)節(jié)滲透壓。當(dāng)成功選出所需菌種進(jìn)行醋酸發(fā)酵時，發(fā)酵瓶中的醋化醋桿菌通常用鋸末或刨花等材料固定化。

（2）甲自交F1中抗蟲:不抗蟲=15:1，說明抗蟲性狀受兩對等位基因控制。甲自交F1中抗除草劑：不抗除草劑=3:1，說明抗除草劑性狀受一對等位基因控制。