Question

【題目】幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，自然界有些植物能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶催化幾丁質(zhì)水解從而抵抗真菌感染。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入沒(méi)有抗性的植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌的能力。下圖表示為獲取幾丁質(zhì)酶基因而建立cDNA文庫(kù)的過(guò)程。

（1）圖示以mRNA為材料通過(guò)_____________法獲得cDNA，該方法依據(jù)的原理是_____________，通過(guò)這種方法獲得的基因中缺乏_____________和_____________結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致將其直接導(dǎo)入受體細(xì)胞中不能復(fù)制和表達(dá)。

（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更易提取到mRNA，原因是_______，且提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_____________。

（3）將從cDNA文庫(kù)中獲得的幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體用_____________酶和DNA連接酶處理后連接起來(lái)，構(gòu)建基因表達(dá)載體，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是_____________。

Answer 1

【答案】反（逆）轉(zhuǎn)錄法 堿基互補(bǔ)配對(duì) 復(fù)制原點(diǎn) 啟動(dòng)子 嫩葉組織細(xì)胞易破碎 防止RNA降解 限制（酶） 磷酸二酯鍵

【解析】

基因工程的操作步驟：獲取目的基因；構(gòu)建基因表達(dá)載體；把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；目的基因的檢測(cè)和鑒定。

（1）構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)，以mRNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理合成DNA，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄合成的基因中無(wú)啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)等結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致將其直接導(dǎo)入受體細(xì)胞中不能復(fù)制和表達(dá)。

（2）嫩葉組織細(xì)胞易破碎，更易提取到mRNA，且提取RNA時(shí)，需添加RNA酶抑制劑可以防止RNA降解。

（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用限制酶和DNA連接酶進(jìn)行處理，限制酶破壞磷酸二酯鍵，DNA連接酶催化磷酸二酯鍵形成。