Question

【題目】為探究M基因的功能，科研人員將克隆得到的M基因導入擬南芥植株(自交繁殖)，流程如圖所示�；卮鹣铝袉栴}：

（1）通過過程a、b，采用______________________法來獲得大量的M基因，過程b中需先加熱至90～95 ℃，然后冷卻至55～60 ℃，冷卻的目的是_________。

（2）為獲得轉基因植物，采用農桿菌轉化法侵染擬南芥的花序。基本過程如下：

①過程d：將重組質粒導入大腸桿菌，其目的是______________。

②過程e：將重組質粒導入農桿菌，再將含有重組質粒的農桿菌離心、富集，得到含有M基因的農桿菌液。

③過程f：在擬南芥植株產生大量花序時，將其花表面部分在農桿菌懸浮液中浸泡20～30 s，3～4周后得到轉化擬南芥植株的種子(T0)。浸泡之前，需先剪去已經長成的角果(這些角果將來可發育成種子)，原因是_____________________________________________________。

④將收獲的擬南芥T0種子，播種在含有___________的培養基上，能健康生長的幼苗含有___________________。

（3）采用農桿菌花序侵染的方法轉化，一般只能將目標片段整合到一條DNA上。若要獲得M基因穩定的突變體，需___________篩選出能穩定遺傳的突變體。

Answer 1

【答案】反轉錄法(逆轉錄法)和PCR 使引物結合到互補DNA鏈上 獲取大量重組質粒(讓目的基因擴增) 這些已受精的角果將來結的種子是非轉基因的 卡那霉素 M(目的)基因 將T0代連續自交

【解析】

基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的獲�。涸�核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法、PCR技術擴增目的基因。

第二步：基因表達載體的構建。

第三步：將目的基因導入受體細胞，常用的轉化方法：

將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法；

將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術。

第四步：目的基因的檢測和表達。

（1）圖中a是利用RNA合成DNA分子，是逆轉錄法獲得目的基因；b是大量擴增目的基因，是PCR技術，PCR技術的操作在90℃下使模板DNA變性、解鏈→50℃下復性（引物與DNA模板鏈結合）→72℃下引物鏈延伸（形成新的脫氧核苷酸鏈），所以冷卻的目的是使引物結合到互補DNA鏈上。

（2）①為了讓目的進大量擴增，所以需要將重組質粒導入大腸桿菌，伴隨大腸桿菌的增殖而不斷增多；

③已受精的角果將來結的種子是非轉基因的，所以為了獲得轉基因的種子，需要先剪去已經長成的角果。

④由于質粒上含有卡拉霉素抗性基因，所以需要將收獲的擬南芥T0種子播種在含有卡拉霉素的的培養基上；能健康生長的幼苗含有質粒，由于質粒和目的基因連接，所以幼苗含有目的基因或M基因。

（3）農桿菌花序侵染的方法轉化，一般只能將目標片段整合到一條DNA上，所以要獲得M基因穩定的突變體，需要將T0不斷自交獲得純合子。