Question

【題目】酶切圖譜是描述限制性內切酶的酶切點的位置和距離信息的圖譜，通常選取某一特定長度的DNA分子，用多種限制酶單獨或聯合切割，再通過電泳技術將酶切片段進行分離，計算相對大小，從而確定每一種限制酶在DNA分子中的切點位置和相對距離。下圖表示BamHⅠ、BstⅠ、BglⅡ三種限制酶識別的核苷酸序列和切割位點，表格中數據是用限制酶EcoR Ⅴ、Mbo Ⅰ單獨或聯合切割同一種質粒，得到DNA片段長度。請回答下列問題：

BamH Ⅰ ―→＋ Bst Ⅰ ―→＋

Bgl Ⅱ ―→＋

酶	DNA片段長度
EcoRⅤ	14 kb
MboⅠ	2.5 kb、11.5 kb
EcoRⅤ＋MboⅠ	2.5 kb、5.5 kb、6 kb

(1)限制性內切酶BamHⅠ與BstⅠ作用的特點是________________，BamHⅠ與BglⅡ作用的特點是________________。黏性末端＋重組的DNA分子________(填“能”或“不能”)被BglⅡ識別。

(2)請在圖中畫出質粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位點。

(3)DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點是都形成________鍵，不同點是____________________________。

(4)在基因工程中，檢測受體細胞是否含有目的基因采用的方法是________________。

Answer 1

【答案】（1）識別相同的核苷酸序列，而且切點相同 識別的核苷酸序列不同，產生相同的黏性末端 不能

(2)見下圖

（3）磷酸二酯 DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵

(4)DNA分子雜交技術

【解析】

試題分析：（1）限制酶BamHⅠ與BstⅠ能識別相同的核苷酸序列，而且切點相同；BamHI與BglⅡ識別的核苷酸序列不同，但能產生相同的黏性末端作。黏性末端重組的DNA序列為GGATCC∥CCTAGG，而限制酶BglⅡ的識別序列為AGATCT∥TCTAGA，根據酶的專一性原理可知，重組DNA分子不能被BglⅡ識別。

（2）用限制酶EcoRV單獨切割時，只能形成一種長度為14kb的DNA片段，說明該質粒上只有一個EcoRV酶切位點；用限制酶MboⅠ單獨切割時，能形成兩種長度分別為2.5 kb、11.5 kb的DNA片段，說明該質粒上有2個MboⅠ酶切位點；用限制酶EcoRV、MboⅠ同時切割時，能形成三種長度分別為2.5 kb、5.5 kb、6 kb的DNA片段，說明11.5kb的DNA片段被切割成兩段，即11.5kb的DNA該片段上有一個EcoRV酶切位點，因此質粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點圖如答案所示。

（3）DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點都形成是磷酸二酯鍵，不同點是DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（4）檢測受體細胞是否含有目的基因常用DNA分子雜交技術。