Question

【題目】海洋藻類上常附著有多種微生物，其中部分在生物醫藥和日用化工等生產領域具有重要的經濟價值，而部分會產生某些毒素污染環境或毒害動物，人們需要對它們進行大量的研究。請回答下列問題：

（1）若要將微生物采用平板劃線法進行分離操作，正確的是圖______。

（2）長期保存菌種時，應將培養的菌液與___________充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱保存，丟棄已經接種過微生物的培養基前，往往需要先行滅菌，以免____________。

（3）用稀釋涂布平板法測定某種微生物的數量，在接種前通常需要檢測固體培養基是否被污染，檢測的方法是____________________________________。

稀釋涂布平板法統計的菌落數往往比樣品中活菌的實際數目要低，這是因為_______。

（4）鑒別培養基中需加入_________才能對微生物中的纖維素分解菌加以篩選。鑒別培養后，培養基中出現了幾個以菌落為中心的透明圈，根據___________________（填 “菌落直徑”、“透明 圈直徑”或“透明圈直徑/菌落直徑”）的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（5）發酵工程常常需要對某些微生物進行固定化，最常用的方法是______________ 法。某真菌產生的油脂不易揮發，可選用_____________（填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”）從菌體中提取，其提取效率主要取決于_________________________。

Answer 1

【答案】B 滅菌的甘油 以免污染環境或者對其他生物產生毒害 將未接種的培養基在適宜的條件下培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落出現 當兩個或多個細胞連在一起時，觀察到的只是一個菌落 剛果紅 透明圈/菌落直徑 包埋法 萃取法 萃取劑的性質和使用量

【解析】

1、菌種保存

	臨時保存法	甘油管藏法
適用對象	頻繁使用的菌種	長期保存的菌種
培養及類型	固體斜面培養基	液體培養基
溫度	4℃	-20℃
方法	菌落長成后于冰箱中保存，每3～6個月將菌種從舊的培養基轉移到新鮮培養基上	將培養的菌液與等體積滅菌后的甘油混合均勻后于冷凍箱內保存
缺點	菌種易被污染或產生變異	\\

2、在進行第二次以及其后的劃線操作時'要從上一次劃線的末端開始劃線。每次劃線后，線條末端細菌的數目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

3、從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株；篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，在培養基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現透明圈。

（1）采用平板劃線法進行分離操作時，每次劃線都要從上一次劃線的末端開始，且首尾不能相連，故選B。

（2）長期保存菌種時，應將培養的菌液與滅菌的甘油充分混勻后，放在-20℃的冷凍箱保存；丟棄已經接種過微生物的培養基前，往往需要先行滅菌，以免以免污染環境或者對其他生物產生毒害。

（3）培養某種微生物時，在接種前要檢測培養基是否被污染。采用的檢測方法是將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生。稀釋涂布平板法可以通過統計菌落數來估算樣品中的活菌數，但菌落數往往比實際細菌數要低，原因是用稀釋涂布平板法統計菌落數目時，有些細菌聚集在一起，形成一個菌落，這樣統計的菌落數往往比活菌的實際數目少。

（4）鑒別培養基是在培養基中加入某種試劑或化學藥品，通過微生物產生的某種代謝產物與其反應產生明顯的特征變化而加以篩選，對纖維素分解菌加以篩選時通常需要加入剛果紅；使用剛果紅染色法時，纖維素酶作用的透明圈的直徑與菌落直徑比越大，酶活性越強，故根據透明圈直徑/菌落直徑的大小可初步篩選出高效纖維素分解菌。

（5）固定化酶和固定化細胞技術是指利用物理或化學方法，將酶或細胞固定在一定空間內的技術，包括包埋法、化學結合法和物理吸附法。對微生物進行固定，最常用的方法是包埋法；對于不易揮發的某真菌產生的油可選用萃取法從菌體中提取。其提取效率主要取決于萃取劑的性質和使用量。