Question

【題目】農桿菌侵染植物細胞后，能將Ti質粒上的T-DNA插入到植物基因組中。圖示為利用農桿菌培育轉基因植物的基本流程，請據圖作答：

（1）剪除Ti質粒的某些片段、替換復制原點O與添加抗生素的抗性基因T的過程①中，需用___________________處理DNA以防止DNA片段的自身環化，需用___________________ “縫合”雙鏈DNA片段的平末端。

（2）目的基因是指編碼蛋白質的結構基因和一些____________________。由過程②形成的運載體中，目的基因的首端具有___________________識別和結合的部位。

（3）過程③常用_______ 處理使農桿菌成為感受態細胞。在過程⑤⑥前，常采用________________技術檢測農桿菌和愈傷組織細胞中是否有目的基因及轉錄產物。

（4）過程④需對植物細胞做沖洗和_______ 處理，然后用________________去除細胞壁。

Answer 1

【答案】（1）多種限制酶 T4DNA連接酶

（2）具調控作用的因子 RNA聚合酶

（3）Ca2+（CaCl2溶液） 核酸分子雜交（基因探針）

（4）消毒 纖維素酶（和果膠酶）

【解析】

試題分析：（1）防止DNA片段的自身環化，需用多種限制酶處理DNA，以形成不同的黏性末端；用T4DNA連接酶“縫合”雙鏈DNA片段的平末端。

（2）目的基因是指編碼蛋白質的結構基因和一些具調控作用的因子。過程②為構建基因表達載體，構建的基因表達載體中，啟動子位于目的基因的首端，是RNA聚合酶識別和結合的部位。

（3）過程③是將表達載體導入農桿菌細胞，常用Ca2+（CaCl2溶液）處理使農桿菌成為感受態細胞。檢測農桿菌和愈傷組織細胞中是否有目的基因常采用DNA分子雜交技術，檢測農桿菌和愈傷組織細胞中是否有目的基因的轉錄產物常采用分子雜交技術。

（4）過程④表示從植物組織中獲取原生質體，需對植物細胞做沖洗和消毒處理，以避免雜菌污染；然后用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁。