Question

【題目】回答下列第(一）、（二)小題：

(一)耐高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。如圖表示從熱泉的嗜熱菌樣品中進行篩選分離菌種，經過耐高溫淀粉酶的提純和固定化后，用于工業化生產的過程。請回答：

（1）①過程進行的操作為________________，②過程實施的是_______________分離法；可根據Ⅰ號培養基上________的大小，來確定需擴大培養的目標菌種。

（2）Ⅰ號培養基中除了加入淀粉外，還需加人另一種重要的營養成分是_________(A.瓊脂B.葡萄糖C.硝酸銨D.碳酸氫鈉），并放在高溫條件下培養。

（3）將適量經提純的耐高溫淀粉酶通過_______法固定在石英砂上，形成固定化酶柱，此后用一定濃度的淀粉溶液進行過柱試驗，可往流出液中滴加______溶液檢測酶的催化效果，但結果發現流出液顯藍色，請分析在上述操作中存在的可能原因是_______(至少寫出兩點）。

(二)通過轉基因技術培育出乳汁中含人β-酪蛋白的山羊，其流程如下圖�；卮鹩嘘P問題。

（1）基因工程的核心是圖中的__________(用圖中數字回答）過程；如果要利用人類基因組構建含β-酪蛋白因的基因文庫，該過程______(填“需要”或“不需要”）限制性核酸內切酶參與。若要檢測乳汁中是否出現人β-酪蛋白，可用的檢測物質是________(填“人β-酪蛋白基因”或“人β-酪蛋白抗體”）。

（2）②過裎一般是通過_________法實現的。當形成轉基因受精卵后，需要經過一段時間的體外培養，這一過程中不需要的措施是___________(A.培養液中加入動物血清 B.培養液要及時更換成分 C.加入飼養層細胞 D.放在C02培養箱中）。

（3）③過程的實現必須通過________技術；通過④過程實現轉基因山羊的克隆繁殖，要通過______技術形成重組細胞后，再經胚胎工程實現。

Answer 1

【答案】 稀釋 涂布 菌落周圍透明圈 C 吸附 KI-I2 固定化操作后未用蒸餾水洗滌；要取反應一段時間后的流出液進行顯色反應；液體過柱的流速過快等 ① 需要 人β-酪蛋白抗體 顯微注射 C 胚胎移植 核移植

【解析】試題分析：據題（一）圖分析，①過程是梯度稀釋，②過程是稀釋涂布平板法接種，目的是篩選單菌落；從功能上看，Ⅰ號培養基屬于選擇培養基，從物理狀態上來說，Ⅱ號培養基屬于固體培養基；采用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法；常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。根據題（二）圖分析，①表示基因表達載體的構建，②表示將目的基因導入受體細胞，③表示胚胎移植過程，④表示胚胎分割移植。

（一）（1）根據以上分析已知，①過程為梯度稀釋，②過程的接種方法為稀釋涂布平板法；部分嗜熱菌在Ⅰ培養基上生長時可產生淀粉酶，分解培養基中的淀粉后會在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說明產生的淀粉酶越多，應挑選透明圈大的菌落接種的Ⅱ號培養基上繼續培養。

（2）在培養微生物的培養基中，碳源和氮源必不可少，所以除淀粉外還應加入硝酸銨作為氮源。

（3）由于酶分子較小，因此固定化酶一般用吸附法；固定化酶催化淀粉水解后流出的液體應該不含淀粉，可往流出液中滴加KI-I2溶液檢測酶的催化效果；若發現流出液顯藍色，在上述操作中存在的可能原因是：固定化操作后未用蒸餾水洗滌；要取反應一段時間后的流出液進行顯色反應；液體過柱的流速過快等。

（二）（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建，即圖中①過程；如果要利用人類基因組構建含β-酪蛋白因的基因文庫，該過程需要限制性核酸內切酶參與；若要檢測乳汁中是否出現人β-酪蛋白，可用抗原-抗體雜交法，因此可用的檢測物質是人β-酪蛋白抗體。

（2）②表示將目的基因導入受體細胞，一般用顯微注射法；受精卵培養過程中，培養液中加入動物血清并及時更換成分，AB正確；不需要進入飼養層細胞，C錯誤；動物細胞培養需要放入C02培養箱中，D正確。

（3）③表示胚胎移植過程；④過程實現轉基因山羊的克隆繁殖，要通過核移植技術形成重組細胞后，再經胚胎工程實現。