Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。請(qǐng)根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題：

（1）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為________________，B為____________________。

（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除__________，達(dá)到該目的的關(guān)鍵是控制離心的____________________。

（3）將收集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析，透析的原理是：_________。

（4）凝膠色譜法是根據(jù)________________________而達(dá)到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

（5）在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡存在，是因?yàn)闅馀輹?huì)____________________，降低分離效果。

（6）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是__________。

（7）分離純化好的血紅蛋白，需要進(jìn)行純度鑒定，在鑒定方法中，使用最多的是_________________。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 雜蛋白(血漿蛋白) 速度和時(shí)間 透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子則保留在袋內(nèi) 相對(duì)分子質(zhì)量的大小 攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)洗脫的次序 準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳

【解析】

蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。凝膠色譜操作包括:凝膠色譜柱的制作、凝膠色譜柱的裝填、樣品的加入和洗脫。據(jù)此分析題圖可知：A為血紅蛋白的釋放，B為樣品的加入和洗脫。

(1) 樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、圖中A所示的血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液。凝膠色譜操作包括:凝膠色譜柱的制作、凝膠色譜柱的裝填、圖中B所示的樣品的加入和洗脫。

(2) 洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白(血漿蛋白)，以利于后續(xù)步聚的分離純化。若離心速度過高和時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度，因此達(dá)到該目的的關(guān)鍵是控制離心的速度和時(shí)間。

(3) 透析袋一般是用硝酸纖維素制成的，透析的原理是：透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而將大分子則保留在袋內(nèi)。

(4) 凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

(5) 在裝填凝膠柱時(shí)，若產(chǎn)生氣泡，則其會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，從而影響分離效果，所以在裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡存在。

(6) 在一定范圍內(nèi)，緩沖溶液能夠抵制外界的酸和堿對(duì)溶液pH值的影響，維持pH值基本不變，所以在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是：準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致。

(7) 瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳是兩種常用的電泳方法。在對(duì)分離純化好的血紅蛋白進(jìn)行純度鑒定時(shí)，使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。