Question

【題目】（一）純化分離細菌的一般步驟如下圖所示：

（1）若分離以尿素為氮源的菌種，培養基中通常加入的凝固劑是_____，用于尿素溶液滅菌的工具是_____。若要對分離的菌種進行計數，步驟X是______方法。

（2）若分離醋化醋桿菌得到如圖所示的結果，那么步驟X需在_____條件下，用______(工具)完成接種。

（3）為了增加純化分離的醋化醋桿數量，需要對其進行______，獲得的菌種可用于制作果醋，將菌種以_______法固定在木屑上，有利于醋酸發酵的進行。

（二）細胞內核苷酸的形成途徑有兩種。途徑1：利用磷酸、核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物合成。途徑2：利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成。氨基蝶呤可阻斷途徑1。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在，但在培養基中僅存活5~7天，實驗所用的骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞。請回答：

（1）用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經過______的小鼠體內獲得，與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用______處理誘導融合。

（2）經誘導后，考慮細胞兩兩融合有3種類型，為了篩選出雜交瘤細胞，需在培養基中加入的特殊物質有____，然后培養____天以上，從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有_____特點。

（3）篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養，為提高細胞克隆的形成率，應在培養中加入用射線照射失去_____能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

（4）克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞，在小鼠體內或體外培養，可獲得抗體。經純化后的抗體應在 _____條件下保存，使其較長時間內保持活性。

Answer 1

【答案】瓊脂糖 G6玻璃砂漏斗 涂布分離 無菌 接種環 擴大培養 吸附 免疫 （滅活的）仙臺病毒或聚乙二醇或低壓交流電場 次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤 7 既能無限增殖又能產生抗體 增殖 4℃或低溫

【解析】

培養基按物理性質分可分固體培養基和液體培養基，液體培養基中加入凝固劑可以制成固體培養基，常用的凝固劑是瓊脂或瓊脂糖，分離以尿素為唯一氮源的微生物時應以瓊脂糖為凝固劑，因為瓊脂是混合物，含有N。微生物常用接種方法有平板劃線法和稀釋涂布分離法，其中平板劃線法更易獲得單菌落，稀釋涂布分離法適合用于微生物計數。動物細胞融合的主要應用是制備單克隆抗體，單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養基篩選出雜交瘤細胞。正常的脾細胞核苷酸合成的兩條途徑都存在但不能無限增殖，僅存活5~7天，且途徑1可被氨基蝶呤阻斷，骨髓瘤細胞是途徑2缺陷型細胞即能利用次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核苷酸，在特定培養基上要選擇保留雜交瘤細胞，則培養基中要加入次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，以阻斷途徑1，據此分析。

（一）（1）若分離以尿素為氮源的菌種，應配置以尿素為唯一氮源的培養基，因此培養基中通常加入的凝固劑是瓊脂糖，用于尿素溶液滅菌的工具是G6玻璃砂漏斗。若要對分離的菌種進行計數，步驟X是稀釋涂布分離法。

（2）若分離醋化醋桿菌得到如右圖所示的結果，那么步驟X需在無菌條件下，用接種環完成接種。

（3）為了增加純化分離的醋化醋桿數量，需要對其進行擴大培養，獲得的菌種可用于制作果醋，將菌種以吸附法固定在木屑上，有利于醋酸發酵的進行。

（二）（1）用于制備單克隆抗體的脾細胞是從經過免疫的小鼠體內獲得，與篩選出的小鼠骨髓瘤細胞用（滅活的）仙臺病毒或聚乙二醇或電刺激處理誘導融合。

（2）經誘導后，考慮細胞兩兩融合有3種類型，為了篩選出雜交瘤細胞，需在培養基中加入的特殊物質有次黃嘌呤、胸腺嘧啶核苷、氨基蝶呤，然后培養7天以上，從而達到篩選目的。篩選出的雜交瘤細胞具有既能無限增殖又能產生抗體特點。

（3）篩選出陽性雜交瘤細胞進行兩次克隆培養，為提高細胞克隆的形成率，應在培養中加入用射線照射失去增殖能力的小鼠成纖維細胞以支持生長。

（4）克隆形成的符合要求的雜交瘤細胞，在小鼠體內或體外培養，可獲得抗體。經純化后的抗體應在4℃或低溫條件下保存，使其較長時間內保持活性。