Question

【題目】【生物一選修3:現代生物科技】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉基因油菜品種。

（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因，然后利用_____________技術分別進行擴增。

（2）選用下圖中的限制酶________處理兩個基因后再用__________酶處理，得到_______（填圖中字母）端相連的融合基因。

（3）將上述融合基因插人上圖所示Ti質粒的T一DNA中，構建_____________并導入農桿菌中。將獲得的農桿菌接種在含____________的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，得到用于轉化的浸染液。剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時間，此過程的目的是 ，進一步培養篩選后獲得轉基因油菜。

（4）用DNA—RNA分子雜交技術確定融合基因是否完成了_______________ 過程。

Answer 1

【答案】（15分，除標注外每空2分）（1）PCR（多聚酶鏈式反應）（1分）

（2）ClaI DNA 連接 A、D

（3）基因表達載體 四環素 將融合基因導人油菜葉片細胞并插入到其染色體DNA上

（4）轉錄

【解析】（1）依題意可知：酶D基因與轉運肽基因都屬于目的基因，擴增目的基因，可利用PCR（多聚酶鏈式反應）技術。

（2）酶D基因的A端與轉運肽基因的D端均含有ClaI的識別位點，因此可選用ClaⅠ限制酶處理兩個基因后獲得相同的粘性末端，再用DNA連接酶處理，得到A、D端相連的融合基因 。

（3）將上述融合基因插入上圖所示Ti質粒的T—DNA中，構建基因表達載體即重組質粒并導入農桿菌中。因用于構建基因表達載體的Ti質粒上有四環素抗性基因，所以成功導入基因表達載體的農桿菌可在含有四環素的培養基上生長，為將其篩選出來，可將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落。剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞并插入到其染色體DNA上，進一步篩選后獲得轉基因油菜。

（4）確定融合基因是否完成了轉錄過程，可采用DNA—RNA分子雜交技術。