Question

【題目】(一）為從養豬場周圍土壤中分離產脲酶的微生物，進行了如下實驗。

（1）培養基的制備：本實驗需在LB固體培養基和尿素固體培養基上進行接種，因尿素_____________，只能用_____________過濾。下列對本實驗選用的尿素固體培養基和LB固體培養基的敘述，錯誤的是（____）

A.都要進行高壓蒸汽滅菌B.都含有N源C.都要添加瓊脂糖D.都要添加酚紅指示劑

（2）制備細菌懸液：在無菌條件下，將土樣加到含有適量____________的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）接種：本實驗采用的接種方法是____________。

(二）某研究小組利用下圖所示的現代生物科學技術生產藥用蛋白一一人組織纖溶酶原激活物（htPA)。請回答：

（1）構建重組表達載體時，通常用_____________切割htPA基因與載體，形成________，再通過DNA連接酶連接。

（2）為獲取更多的實驗用受精卵，要對供卵母羊注射相應激素，使其________________，獲得較多的卵母細胞。采集的精子需要經過________________處理，才具備受精能力。

（3）若想獲得更多轉htPA基因母羊，還可以對含有htPA基因的胚胎進行________________。 然后再通過________________技術可獲得較多后代。

（4）下列有關基因工程的敘述，正確的是（____）

A.載體上的抗性基因有利于篩選含重組DNA的細胞和促進目的基因的表達

B.大腸桿菌質粒是基因工程最常用的載體

C.若目的基因的序列是未知的，可選用PCR技術擴增目的基因

D.DNA連接酶催化形成氫鍵和磷酸二酯鍵的形成

Answer 1

【答案】 加熱會分解 G6玻璃砂漏斗 D 無菌水 涂布法（或涂布分離法） 相同限制性核酸內切 相同的粘性末端 超數排卵 獲能 胚胎分割 胚胎移植 B

【解析】試題分析：從土壤中分離目的微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

(一）（1）尿素加熱會分解，所以實驗過程中只能用G6玻璃砂漏斗進行過濾。尿素固體培養基和LB固體培養基都含有N元素，一般都用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，且都需要進入瓊脂以使得培養基成為固態；后者需要加入酚紅指示劑，但是前者不需要。

（2）為了防止雜菌污染，在無菌條件下，將土樣加到含有適量無菌水的三角瓶中，振蕩搖勻，并以此方法制備不同濃度的土壤稀釋液。

（3）據圖可知，該實驗的接種方法為稀釋涂布平板法。

(二）（1）在基因工程中，構建基因表達載體時，把目的基因與運載體一般用同種限制酶進行切割，再用DNA連接酶連接，以構建基因表達載體。

（2）超數排卵處理時，需要注射促性腺激素；采集的精子必須經過獲能處理后才具備受精能力。

（3）早期胚胎細胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技術獲得多個轉基因個體。

（4）載體上的抗性基因是可用于篩選含重組DNA的細胞，但不能促進目的基因的表達，A錯誤；大腸桿菌質粒是基因工程最常用的載體，B正確；利用PCR技術擴增目的基因的前提，是要有“一段已經目的基因的核苷酸序列”，C錯誤；DNA連接酶催化形成磷酸二酯鍵的形成，D錯誤。