Question

【題目】乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實驗表明這兩種蛋白質都可引起實驗動物的免疫反應�？蒲腥藛T用農(nóng)桿菌轉化法培育出轉基因番茄，用于生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗，回答下列問題：

（1）T1蛋白和T2蛋白進入實驗動物的腸道后，會被實驗動物小腸黏膜上的一種M細胞當做_________處理，進而引發(fā)一系列的免疫反應，最終產(chǎn)生相應的_________________，使實驗動物獲得了對乙肝病毒的免疫能力。

（2）用轉基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），所用的目的基因是____________，所用的運載體是土壤農(nóng)桿菌的________________。

（3）可利用PCR技術擴增目的基因，其前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_________。PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，目的基因在乙肝病毒DNA中的位置如圖所示，則在____________（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）次循環(huán)結束后，即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因片斷。

（4）獲得轉基因番茄植株后，通過分子檢測，已確定該植株所結番茄中含有T2蛋白，此后還需要進行個體生物學水平的鑒定，例如___________________________________。

Answer 1

【答案】 抗原 記憶細胞（抗體和記憶細胞） T1蛋白基因 Ti質粒 引物 第三次 用轉基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對實驗動物進行免疫接種實驗 。

【解析】試題分析： 1、目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。2、PCR的原理是DNA雙鏈復制；擴增過程是在較高溫度下進行的，因此需要加入耐高溫的DNA聚合酶（或Taq酶）。利用PCR技術擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。3、農(nóng)桿菌的Ti質粒上的T-DNA具有可轉移到受體細胞并整合到受體細胞的染色體DNA上的特點，因此攜帶外源基因的DNA片段必須插入到T-DNA片段（內(nèi)部）部位。

（1）T1蛋白和T2蛋白是乙肝病毒表面的蛋白質，進入實驗動物的腸道后，會被當做抗原處理，進而引發(fā)一系列的免疫反應，最終產(chǎn)生相應的記憶細胞和抗體。

（2）用轉基因番茄生產(chǎn)可口服的乙肝病毒疫苗（含T1蛋白），目的基因的產(chǎn)物是T1蛋白，因此所用的目的基因是T1蛋白基因。根據(jù)題干中“用農(nóng)桿菌轉化法培育出轉基因番茄”可知：所用的運載體是土壤農(nóng)桿菌的Ti質粒。

（3）PCR技術擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成引物。
由圖分析可知：

X基因第一次復制得到兩個兩種DNA片段：①和②；

X基因第二次復制得到四個四種DNA片段：①復制得①和③、②復制得②和④；

X基因第三次復制得到八個五種DNA片段：①復制得①和③、③復制得③和⑤、②復制得②和④、④復制得④和⑤。

結合上圖進行分析：在第三次次循環(huán)結束后，即可出現(xiàn)兩條鏈等長的目的基因（⑤）片斷。（4）獲得轉基因番茄植株后，通過分子檢測，已確定該植株所結番茄中含有T2蛋白。根據(jù)題干“乙肝病毒表面有T1蛋白和T2蛋白，免疫接種實驗表明這兩種蛋白質都可引起實驗動物的免疫反應”，因此在個體生物學水平上，用轉基因番茄植株生產(chǎn)的T2蛋白對實驗動物進行免疫接種實驗來鑒定。