Question

【題目】神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，是血管內(nèi)皮生長因子家族成員的受體，通過參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細(xì)胞中擴增出NRP-1基因并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，分離提純相應(yīng)NRP-1，并將其免疫小鼠，以制備抗NRP-1的單克隆抗體（NRP-1MAb）。分析回答下列回題：

（1）利用PCR技術(shù)可以從腫瘤細(xì)胞的基因組中分離擴增得到完整的NRP基因，其原因是__________。將擴增后的目的基因構(gòu)建成表達(dá)載體后，導(dǎo)入用__________處理的大腸桿菌體內(nèi)完成轉(zhuǎn)化。

（2）研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后，取其脾臟中B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是__________。選取檢測抗體陽性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時需要的氣體環(huán)境是__________。

（3）為進(jìn)一步確定NRP-1MAb靶向治療時的用藥方式，研究人員將直腸癌組織塊制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種3后天開始向培養(yǎng)液中施加NRP-1MAb藥物，每隔10天給藥1次，共4次。給藥后測算一次腫瘤體積，結(jié)果如下圖所示：

分析上圖可以得出的結(jié)論是__________。根據(jù)實驗結(jié)果，請給出使用NRP-1MAb進(jìn)行靶向治療癌癥時的臨床建議：__________。

Answer 1

【答案】使用與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合的引物可以從模板DNA中擴增出該基因 Ca2+ 未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞 95%的空氣和5%的CO2 NRP-1MAb能有效的降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著 使用中劑量給藥

【解析】

1、利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，由于DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈，因此要用兩種引物才能確保DNA兩條鏈同時被擴增；引物I延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結(jié)合，進(jìn)行DNA的延伸，這樣，DNA聚合酶能特異地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列。

2、分析圖可知，實驗組與對照組比較，NRP-1MAb能有效的降低腫瘤的體積；低、中、高劑量組比較可知，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著。

（1）由分析可知，使用與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合的引物，可以從模板DNA中擴增出處于兩個引物之間的該基因。將目的基因?qū)�入大腸桿菌，最常用的轉(zhuǎn)化方法是，用Ca2+處理細(xì)胞使其處于感受態(tài)。

（2）用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞。進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)時，通常將培養(yǎng)基放置于95%的空氣和5%的CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）由圖示可以看出，與對照組比較，NRP-1MAb能有效的降低腫瘤的體積；低、中、高劑量組比較可知，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著，因此使用NRP-1MAb進(jìn)行靶向治療癌癥時采用中劑量給藥，用藥量少，效果明顯。