Question

【題目】請根據血紅蛋白的提取和分離流程圖回答下列問題：

（1）將實驗流程按先后順序補充完整：________、_________。

（2）凝膠色譜法的基本原理是根據________________分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除_________，洗滌干凈的標志是________________。為防止血液凝固，在采血容器中通常要預先加入___________。

（4）凝膠色譜操作結束后，需要用電泳來對蛋白質進行純度鑒定，電泳利用了待分離樣品中各種分子的 ____________的特性，使帶電分子產生不同的________，從而實現樣品中各種分子的分離。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質結合形成蛋白質-SDS復合物，由于SDS_________，從而使電泳的遷移率完全取決于分子的大小。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 凝膠色譜柱的裝填 蛋白質相對分子質量的大小 雜蛋白（或血漿蛋白） 離心后的上清液不再呈現黃色 檸檬酸鈉 帶電性質差異以及分子本身的大小、性狀的不同 遷移速度 所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別

【解析】

理清血紅蛋白的提取和分離的實驗原理、樣品處理和凝膠色譜操作的流程及其注意事項等相關知識。在此基礎上，以圖示中的“箭頭指向和文字信息”為切入點，從中把握所蘊含的生物學信息，進而對相關題情境進行分析解答。

（1）血紅蛋白的提取和分離流程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析→凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫。可見，A表示血紅蛋白的釋放，B表示凝膠色譜柱的裝填。

（2）凝膠色譜法的基本原理是：根據相對分子質量的大小分離蛋白質。

（3）洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續步驟的分離純化。洗滌干凈的標志是離心后的上清液不再呈現黃色。為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入抗凝血劑檸檬酸鈉，其比例是每100mL血液加入3.0g檸檬酸鈉。

（4）電泳利用了待分離樣品中各種分子的帶電性質差異以及分子本身的大小、性狀的不同的特性，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而實現樣品中各種分子的分離。

（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中，SDS能與各種蛋白質結合形成蛋白質-SDS復合物，由于SDS所帶負電荷的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而掩蓋了不同種蛋白質間的電荷差別，從而使電泳的遷移率完全取決于分子的大小。