Question

【題目】大腸桿菌是人和許多動物腸道中最主要且數量最多的一類細菌，含有2000種以上的蛋白質。回答下列問題：

（1）大腸桿菌的培養基為牛肉膏蛋白胨培養基，此培養基為大腸桿菌的生長提供____________。培養大腸桿菌時，在接種前通常需要檢測固體培養基是否被污染，檢測的方法是___________。

（2）利用平板劃線法純化大腸桿菌時，通過接種環在培養基表面連續劃線，將聚集的菌種________分散到培養基的表面；長期保存純化后的菌種，可以采用_______的方法。稀釋涂布平板法是根據培養基上的菌落的數目來推測樣品中的活菌數，其原理是_________________________________。

（3）利用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質過程如圖一，正確的加樣順序是______________。圖二、圖三分別是同學甲、乙利用同一種樣品分離得到的結果，則圖三中與圖二中蛋白質P對應的是_____。

Answer 1

【答案】碳源、氮源、維生素、水和無機鹽 將未接種的培養基在適宜的條件下培養一段時間，觀察培養基上是否有菌落出現 逐步稀釋 甘油管藏 培養基表面的一個菌落來源于樣品中的一個活菌 ②③④① 丙

【解析】

凝膠色譜法的原理是：小分子蛋白質容易進入凝膠內部的通道,路程較長、移動速度較慢，后被洗脫出來:而分子質量較大的蛋白質無法進入凝膠內部的通道，路程較長、移動速度較快，先被洗脫出來。

（1）微生物生長都需要碳源、氮源、水和無機鹽等基本條件，蛋白陳是將肉、酪素或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成，富含有機氮化合物，也含有一些維生素和糖類，因此添加在培養基中主要作為氮源，也可提供碳源和維生素，故牛肉膏蛋白胨培養基可為大腸桿菌提供碳源、氮源、維生素、水和無機鹽；檢測培養基是否被污染，需在接種前將空白培養基即未接種的培養基放在適宜的條件下放置一段時間，觀察培養基上是否有菌落出現，若有菌落出現，則說明培養基被污染或滅菌不徹底，不能用于接種實驗；

（2）平板劃線法是一種通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基表面的接種方法；若要長期保存純化后的菌種，可以采用甘油管藏的方法；稀釋涂布平板法可用于活菌的計數是因為培養基表面的一個菌落來源于樣品中的一個活菌；

（3）利用凝膠色譜法分離大腸桿菌蛋白質時正確的加樣順序是調整緩沖液面、滴加透析樣品、演那個品滲入凝膠床、再調整緩沖液面，故順序為②③④①；SDS凝膠電泳裝置是垂直的裝置，此種電泳方法主要取決于蛋白質分子量的大小，與電荷無關，同時加樣在“-”極，通電后，樣品蛋白質向“+”極移動，分子量相對小的，移動距離大，因此從圖二的電泳結果分析，P比N、M移向“+”距離大，說明P的分子量相對比較小，因此洗脫出來的時間比較長，符合圖三中的丙。