Question

【題目】某研究小組從牛的瘤胃中采集樣本，進行分解尿素的微生物的分離與計數(shù)。實驗基本步驟如下：

（1）分解尿素的微生物含有_____，因此，配制培養(yǎng)基時以尿素作為唯一氮源，尿素會被分解成________使培養(yǎng)基的堿性增強。

（2）配制培養(yǎng)基時，需添加瓊脂，瓊脂起_____作用；培養(yǎng)基中添加_____作為指示劑，可使目標(biāo)菌落的周圍產(chǎn)生紅色環(huán)帶。

（3）該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間， 這樣做的目的是__________；然后將 1mL 瘤胃樣液稀釋 1000 倍，在 3 個平板上用涂布法分別接入 0．1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3 個平板的菌落數(shù)分別為 49、47 和 45。據(jù)此可得出每升瘤胃樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為_____，理論上，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往_______________（低、等、高）于接種的實際活菌數(shù)目。

Answer 1

【答案】脲酶（分解尿素的酶） 氨（NH3） 凝固劑 酚紅 檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 4．7×108 低

【解析】

本題主要考查微生物的培養(yǎng)、分解尿素的細菌的鑒定等知識點。由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅。

（1）分解尿素的微生物含有脲酶（分解尿素的酶），因此，配制培養(yǎng)基時以尿素作為唯一氮源，尿素會被分解成氨（NH3）使培養(yǎng)基的堿性增強。
（2）配制培養(yǎng)基時，需添加瓊脂，瓊脂起凝固劑作用；培養(yǎng)基中添加酚紅作為指示劑，可使目標(biāo)菌落的周圍產(chǎn)生紅色環(huán)帶。

（3）該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后將1mL瘤胃樣液稀釋1000倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個平板的菌落數(shù)分別為49、47和45，因此據(jù)此可得出每升瘤胃樣液中分解尿素的（1L=1000mL）中的活菌數(shù)=（49+47+45）/3×1000×10×1000=4.7×108。由于每個菌落可能是一個或多個活菌增殖而來，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往低于接種的實際活菌數(shù)目。