Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞(ES細胞)對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的________。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到________期時，可從其內細胞團分離出ES細胞。

（3）步驟③中，需要構建含有Rag2基因的表達載體。可以根據Rag2基因的__________設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。用Hind?和Pst?限制酶分別在片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有_____酶的酶切位點。

（4）為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的_____，用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。

Answer 1

【答案】細胞核 囊胚 核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ 蛋白質

【解析】

1、動物核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核移入一個去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發育為動物個體。

2、胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內細胞團）。

3、在基因工程中，目的基因和質粒需要用同種限制酶進行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質粒。

4、目的基因分子水平上的檢測：

①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；

②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。

（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核。

（2）內細胞團位于囊胚中，所以重組胚胎培養到囊胚期。

（3）設計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據Rag2基因的核苷酸序列進行設計。Rag2基因是利用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割獲得的，所以表達載體應具有HindⅢ和PstⅠ的酶切位點。

（4）基因表達的產物是蛋白質，所以提取小鼠骨髓細胞的蛋白質進行抗原-抗體雜交。