Question

【題目】如圖是利用羊來生產人抗凝血酶（AT）的基本流程．圖中ampR表示氨芐青霉素抗性基因，如tetR表示四環素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ為三種限制酶及酶切位點．據圖回答問題：

（1）通過逆轉錄人工合成的AT基因____（填“有”或“無”）內含子，可采用______技術來擴增獲得的AT基因。

（2）圖中將人AT基因插入到質粒前，需要用______________限制酶同時切割載體和含AT基因的片段，篩選含有重組質粒的大腸桿菌首先需要在含____________的培養基上進行。

（3）重組質粒上啟動子的功能是____________________。過程①可采用_________法將重組質粒導入羊受精卵中。羊的早期胚胎發育至_______________階段后通過過程②移植到代孕羊體內。

（4）可采用________________技術從分子水平來檢測AT基因是否表達成功。

Answer 1

【答案】 無 PCR（多聚酶鏈式反應） HindⅢ和BamH I 氨芐青霉素 驅動目的基因轉錄 顯微注射 桑椹胚或囊胚 抗原一抗體雜交

【解析】試題分析：基因工程技術的基本步驟：目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成；基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。分析題圖：圖中①表示將目的基因導入受體細胞；②表示胚胎移植技術。

（1）真核生物基因的編碼區包含外顯子和內含子，但是翻譯的模板mRNA只是由外顯子轉錄而來，因此通過逆轉錄人工合成的AT基因沒有內含子，可采用PCR（多聚酶鏈式反應）技術來擴增獲得的AT基因。

（2）由于質粒中只含有兩種限制酶切點，因此圖中將人AT基因插入到質粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同時切割載體和含AT基因的片段；質粒中氨芐青霉素抗性基因作為標記基因，用于檢測目的基因是否導入受體細胞，因此篩選含有重組質粒的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養基上進行。

（3）重組質粒上啟動子的功能是驅動目的基因轉錄．過程①可采用顯微注射的方法將重組質粒導入羊受精卵中，羊的早期胚胎發育至桑椹胚或囊胚階段后通過過程②移植到代孕羊體內。

（4）可采用抗原一抗體雜交技術從分子水平來檢測AT基因是否表達成功。