Question

【題目】下圖是制備抗埃博拉病毒VP40蛋白的單克隆抗體的過程：

（1）若要體外獲得大量的VP40基因，可采用_______技術進行擴增，若該目的基因循環(huán)擴增3次，理論上需要消耗_______個引物。

（2）過程①中選用EcoRⅠ和XhoⅠ兩種限制酶切割的優(yōu)點是____________________，此外還要用到________酶。

（3）過程②中首先需要用Ca2＋處理大腸桿菌，使其處于________，VP40基因進入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達的過程稱為____________。

（4）與植物原生質體融合相比，過程④特有的誘導融合的方法是用____________處理。通常在選擇培養(yǎng)基中需加入__________，目的是防止培養(yǎng)過程中的污染。選擇培養(yǎng)基上存活的雜交瘤細胞產生的抗體________(填“是”或“不是”)單克隆抗體，對雜交瘤細胞還需要進行_________培養(yǎng)和_______________，最終獲得單克隆抗體。

（5）上述克隆技術_________（填“能”或“不能”）體現動物細胞的全能性，_____________技術體現了動物細胞核的全能性。

Answer 1

【答案】PCR 14 防止自身環(huán)化 DNA連接 感受態(tài) 轉化 滅活的病毒 抗生素 不是 克隆化 抗體檢測（專一抗體陽性檢驗） 不能 動物體細胞核移植

【解析】

上圖表示轉基因技術生產埃博拉病毒蛋白疫苗以及用VP40蛋白作為抗原注射到小鼠體內，引起小鼠的免疫反應，然后提取相應的漿細胞與骨髓瘤細胞融合制備單克隆抗體的過程。過程①為VP40基因表達載體的構建，過程②是將該基因表達載體導入大腸桿菌體內，過程③是利用大腸桿菌生產VP40蛋白。過程④為漿細胞與骨髓瘤細胞的融合過程。

（1）采用PCR技術可擴增大量的目的基因片段，引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始復制，PCR技術運用了DNA復制的原理，因此目的基因擴增3代后產生子代DNA分子23，含16條鏈。又由于親代DNA分子的兩條鏈中不含引物，因此需要消耗23×2-2=14個引物。

（2）用限制酶EcoRⅠ和XhoⅠ切割產生不同末端，可防止目的基因和運載體自身環(huán)化，保證了目的基因和質粒的定向連接，另外還需要DNA連接酶構建磷酸二酯鍵將黏性末端的接口進行連接。

（3）用Ca2＋處理大腸桿菌，使其處于感受態(tài)，使基因表達載體更容易進入大腸桿菌內。VP40基因進入大腸桿菌后維持穩(wěn)定并表達的過程稱為轉化。

（4）與植物原生質體融合相比，誘導動物細胞融合特有的誘導融合的方法是用滅活的病毒處理。為防止培養(yǎng)過程中雜菌的污染，通常在選擇培養(yǎng)基中加入抗生素。從小鼠體內提取的B淋巴細胞不止一種類型，故篩選得到的雜交瘤細胞產生的抗體不是單克隆抗體，故還要經篩選，得到的細胞還需轉移至多孔培養(yǎng)板中進行再次篩選。即對雜交瘤細胞還需要進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，最終獲得單克隆抗體。

（5）上述克隆并沒有形成動物個體，故不能體現動物細胞的全能性，動物體細胞核移植技術體現了動物細胞核的全能性。