Question

【題目】如圖表示構建基因表達載體所用的質粒與目的基因。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。據圖分析，下列敘述正確的是（ ）

A.使用限制酶Ⅰ、Ⅱ切割可以防止目的基因自身環化

B.限制酶Ⅱ可以切割兩種標記基因，所以沒有特異性

C.可以用限制酶Ⅱ切割質粒、限制酶工切割目的基因

D.將目的基因插入到四環素抗性基因內完成構建

Answer 1

【答案】D

【解析】

已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，酶Ⅰ切割質粒不會把兩個標記基因都破壞，最好選擇限制酶I切割質粒。限制酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC-，目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列，因此用限制酶II切割目的基因所在的DNA。

A、限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-，兩者產生的粘性末端相同，不能防止目的基因自身環化，A錯誤；

B、限制酶Ⅱ可以切割兩種標記基因，是因為兩種標記基因中含有-GATC-核苷酸序列，限制酶識別切割位點具有特異性，B錯誤；

C、目的基因只有一端具有GGATCC的片段，只能用限制酶Ⅱ切割。質粒上有兩個GATC片段，若用限制酶Ⅱ切割，會將質粒切成兩小段，只能用限制酶Ⅰ切割，C錯誤；

D、用限制酶Ⅰ切割質粒的切割位點在四環素抗性基因內部，所以將目的基因插入到四環素抗性基因內完成構建，D正確。

故選D。