Question

【題目】目的基因的分離、克隆以及目的基因的結(jié)構(gòu)與功能研究，一般位于整個(gè)基因工程的上游。將含有某種生物不同基因的許多DNA片段導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，可獲得該種生物的基因文庫(kù)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）目的基因可以在構(gòu)成基因文庫(kù)的受體菌中____________________。從基因多少的角度分析，cDNA文庫(kù)含有某種生物的__________。

（2）區(qū)別于基因組文庫(kù)，在構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)需要用到__________酶，從cDNA文庫(kù)中獲得的目的基因__________（填“不含有”或“含有”）啟動(dòng)子。

（3）從基因文庫(kù)中提取目的基因比較復(fù)雜，下圖為一種思路：

該過(guò)程中需將纖維素膜上的細(xì)菌裂解，其目的是____________，再用32P標(biāo)記的____________作為探針進(jìn)行雜交。依據(jù)雜交結(jié)果，進(jìn)一步操作為__________________________，才能獲得含有目的基因的受體菌。

Answer 1

【答案】穩(wěn)定存在并遺傳 部分基因 逆轉(zhuǎn)錄 不含有 釋放出DNA 目的基因 選取培養(yǎng)基上的a菌落繼續(xù)培養(yǎng)

【解析】

1、基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)。其中基因組文庫(kù)包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫(kù)只包含某種生物的部分基因，如：cDNA文庫(kù)。

2、以mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體（常用噬菌體或質(zhì)粒載體）連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個(gè)細(xì)菌含有一段cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱(chēng)為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù)。

3、基因組文庫(kù)與cDNA文庫(kù)比較：

文庫(kù)類(lèi)型	cDNA	基因組文庫(kù)
文庫(kù)大小	小	大
基因中啟動(dòng)子	無(wú)	有
基因中內(nèi)含子	無(wú)	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

（1）目的基因可以在構(gòu)成基因文庫(kù)的受體菌中穩(wěn)定存在并遺傳。基因組文庫(kù)包含某種生物所有的基因，而部分基因文庫(kù)只包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫(kù)。

（2）區(qū)別于基因組文庫(kù)，在構(gòu)建cDNA文庫(kù)時(shí)需要用到逆轉(zhuǎn)錄酶，由于cDNA文庫(kù)中的目的基因是mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成的，故不含有啟動(dòng)子。

（3）由于目的基因存在于菌體中，所以上述過(guò)程需將纖維素膜上的細(xì)菌裂解，其目的是釋放出DNA，再用32P標(biāo)記的目的基因作為探針進(jìn)行雜交。依據(jù)雜交結(jié)果，a菌落的細(xì)菌DNA中出現(xiàn)了雜交帶，說(shuō)明a菌體中含有目的基因，可選取培養(yǎng)基上的a菌落繼續(xù)培養(yǎng)，才能獲得含有目的基因的受體菌。