Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題

（一）自生固氮菌是一類能獨立固定氮氣的細菌，其中有些好氧種類能產生 PHB（一種生物可降解的熱塑性塑料）。現欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產 PHB 的固氮菌，操作流程如下：采集土樣→富集培養→分離、純化培養→初步篩選 PHB 固氮菌→篩選高產 PHB 固氮菌→保存備用。請回答：

（1）富集培養時，為達到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養液時不應添加________ 。培養時要將裝有培養液的錐形瓶放置在__________上振蕩培養，主要目的是為細菌的生長提供 ____________。

（2）用于篩選高表達量菌株的方法之一是經涂布分離獲得______。涂布分離時用_______ 將菌液均勻涂布在培養基上，此時所使用的培養基與富集培養時有所不同，添加了一定量的_____________。

（3）在純化過程中，在固體培養基上劃線時，下列操作正確的是__________。

A．接種環采用 70%酒精滅菌

B．接種時應在酒精燈火焰附近進行

C．劃線時要將最后一區的劃線與第一區的劃線相連

D．劃線分離時，需要把接種環深入到培養基中進行接種

（二）毛角蛋白11型中間絲（KIF II）基因與絨山羊的羊絨質量密切相關，獲得轉KIF II基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖：

（1）轉基因過程用到的工具酶有_______________和____________。

（2）在過程②中，用________處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。由于人們對動物細胞所貓營養物質還沒有完全搞清楚，因此在培養細胞時需在培養液中加入一定量的_________，在培養過程中，應將培養瓶宜于__________中培養。

（3）若要獲得多只相同的轉基因山羊，可對圖中早期胚胎進行_________后進行胚胎移植。

（4）下列有關墓因工程的敘述，正確的是___________。

A．切割目的基因和載體DNA時為獲得相同的枯性末端，必須用相同的限制性核酸內切酶

B．基因工程的原理是基因重組，其核心是上圖中的過程④

C．圖示過程獲得的轉基因絨山羊并不是克隆動物

D．重組表達載體上含有RNA聚合的的識別結合位點

Answer 1

【答案】含氮物質（氮源） 搖床 充足的氧氣 單菌落 玻璃刮刀 瓊脂糖 B 限制性核酸內切酶 DNA連接酶 胰蛋白酶 動物血清 CO2培養箱 胚胎分割 D

【解析】

微生物分離方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，都是為了獲得單菌落，所以經涂布分離可以獲得單菌落，該過程需要倒平板制備固體培養基，需要添加凝固劑瓊脂；轉基因獲得高絨質絨山羊過程中，需要用到限制性核酸內切酶和DNA連接酶，圖中①表示構建基因表達載體，②表示胰蛋白酶處理成單個細胞，③表示用促性腺激素進行超數排卵處理，④表示核移植。

（一）（1）富集培養時，為達到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養液時不應添加氮源。培養時要將裝有培養液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養，主要目的是為細菌的生長提供充足的氧氣。

（2）用于篩選高表達量菌株的方法之一是經涂布分離獲得單菌落。涂布分離時用玻璃刮刀將菌液均勻涂布在培養基上，此時所使用的培養基與富集培養時有所不同，富集培養是液體培養基，分離單菌落需要固體培養基，故添加了一定量的瓊脂糖。

（3）在純化過程中，在固體培養基上劃線時，一定要注意嚴格無菌條件，其中接種環采用灼燒滅菌，A錯誤；接種時應在酒精燈火焰附近進行，B正確；劃線時最后一區的劃線與第一區的劃線不能相連，C錯誤；劃線分離時，需要把接種環接觸到培養基表面進行接種，而不能深入到培養基中，D錯誤；故正確的是B。

（二）（1）①表示基因表達載體的構建過程，首先需要限制酶切割含有目的基因的DNA和運載體DNA，再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組質粒，故用到的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶。

（2）在過程②中，用胰蛋白酶處理將皮膚組織塊分散成單個成纖維細胞。由于人們對動物細胞所貓營養物質還沒有完全搞清楚，因此在培養細胞時需在培養液中加入一定量的動物血清，在培養過程中，應將培養瓶宜于CO2培養箱中培養。

（3）若要獲得多只相同的轉基因山羊，可對圖中早期胚胎進行胚胎分割后進行胚胎移植。

（4）切割目的基因和載體DNA時為獲得相同的枯性末端，一般用相同的限制性核酸內切酶，也可用兩種限制性內切酶，A錯誤；基因工程的原理是基因重組，其核心是上圖中的過程①，B錯誤；圖示過程獲得的轉基因絨山羊，利用了核移植、早期胚胎培養、胚胎分割等技術，屬于克隆動物，C錯誤；重組表達載體上含有RNA聚合的的識別結合位點，以起始轉錄，D正確；故正確的是D。