Question

【題目】人類是乙型肝炎病毒的唯一宿主，現有的肝硬化、肝癌多從乙肝發展而來，接種乙肝疫苗是預防乙肝病毒感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的研制先后經歷了血源性疫苗和基因工程疫苗階段。乙肝基因工程疫苗的生產和使用過程如下：

（1）從圖可知，該目的基因的具體功能是______。

（2）若要迅速獲取大量的目的基因，以提高重組質粒生產的效率，常用的技術是（寫全稱）______。過程②常需要 處理大腸桿菌細胞，促使轉化完成。

（3）要形成有效的重組質粒，選擇適當的限制性內切酶很重要，圖1示意大腸桿菌質粒的相關基因與限制酶切點；圖2示意有關限制酶在DNA分子中的具體切點。

①要成功轉入目的基因，有兩種選擇限制酶的方案，它們分別是______或______。

②下圖是篩選、獲取含有目的基因大腸桿菌的基本過程：B、C培養基中除基本營養物質外還應分別加入的抗生素 、 ，在B、C兩個培養基中含有重組質粒的大腸桿菌形成的菌落共有 個。

Answer 1

【答案】（1）指導乙肝病毒蛋白質外殼的合成

（2）PCR Ca2+

（3）①只用BamH Ⅰ 同時用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ

②卡那霉素和四環素 卡那霉素 兩

【解析】（1）根據圖中④目的基因最終產生乙肝病毒外殼進行接種，說明該目的基因具體功能是指導合成乙肝病毒蛋白。

（2）本題較為簡單但學生卻容易忽略而出錯，記不清楚PCR全稱為多聚酶鏈式反應；過程②常需要Ca2+處理大腸桿菌細胞，促使轉化完成。

（3）①只用BamH Ⅰ切割，在獲取目的基因和切割質粒時使目的基因和質粒兩端產生相同的黏性末端，而在連接酶作用會出現自身環化、目的基因自身與自身連接、質粒自身與自身連接、目的基因與質粒連接多種情況，需要篩選；同時用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ切割，質粒和目的基因兩端不會形成相同黏性末端，在連接酶作用下不會發生環化還可以防止反向連接，最終在連接酶作用下只會出現目的基因與質粒成功重組和沒有進行重組的質粒．

②本題考查在獲得重組質粒時不會切割四環素抗性基因，由圖二知BamHⅠ可切割破壞四環素抗性基因，所以出現能保持四環素抗性基因完整的應該是用HindⅢ和EcoRⅠ進行切割質粒，所以最終會出現成功重組的質粒和沒有進行重組的質粒保持四環素抗性基因完整，為2種．。 本題主要考察篩選含目的基因受體細胞方法，依據原理是根據重組質粒上的抗性基因做抗性接種試驗，觀察受體細胞是否能夠存活，存活的則含有重組質粒，即含有目的基因，因此可以在培養基中加入卡那霉素和四環素。