Question

【題目】下表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖 1、圖 2 中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

【1】若圖 2 中目的基因 D 是人的 α-抗胰蛋白酶的基因，現(xiàn)在要培養(yǎng)乳汁中含 α-抗胰蛋白酶的羊，研究者需將該基因與質(zhì)粒重組后，通過(guò)______方法）注入到羊的_____中。

【2】Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是_________。Sau3AI 酶能不能切開(kāi) BamH I 酶與 Bcl I 酶的識(shí)別序列？_____。

【3】用圖 1 中質(zhì)粒和圖 2 目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用_____、_____兩種限制酶切割。

【4】被限制酶切割后的運(yùn)載體和目的基因片段，通過(guò)_____酶作用后獲得重組質(zhì)粒。

【5】若 BamH I 酶切的 DNA 末端與 Bcl I 酶切的 DNA 末端連接，連接部位的 6 個(gè)堿基對(duì)序列為_____。

【6】若按照 65 題中的兩種限制酶切割，并將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，則導(dǎo)入成功的大腸桿菌

A.對(duì)四環(huán)素敏感對(duì)氨芐青霉素不敏感B.對(duì)四環(huán)素不敏感對(duì)氨芐青霉素敏感

C.對(duì)四環(huán)素和氨芐青霉素都敏感D.對(duì)四環(huán)素和氨芐青霉素都不敏感

Answer 1

【答案】

【1】 顯微注射 受精卵

【2】 能

【3】 Bcl I HindⅢ

【4】DNA連接酶

【5】

【6】B

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

【1】

基因與質(zhì)粒重組后，通過(guò)顯微注射的方法注入到羊的受精卵中。

【2】

根據(jù)表格中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，可知Sau3AI 酶切割 DNA 得到的粘性末端是；由于BamH I 酶與 Bcl I 酶的識(shí)別序列中都包括Sau3AI的識(shí)別序列，所以能切開(kāi)二者的識(shí)別序列。

【3】

由于BamH I和Sau3AI會(huì)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)抗性基因，不利于后期的篩選，所以應(yīng)選用限制酶Bcl I和HindⅢ。

【4】

被限制酶切割后的運(yùn)載體和目的基因片段，通過(guò)DNA連接酶連接二者之間的磷酸二酯鍵，從而獲得重組質(zhì)粒。

【5】

根據(jù)BamHⅠ和BclI的酶切位點(diǎn)，若BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接，則連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為。

【6】

用限制酶Bcl I和HindⅢ切割，會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，但不會(huì)破壞四環(huán)素抗性基因，則導(dǎo)入成功的大腸桿菌對(duì)四環(huán)素不敏感對(duì)氨芐青霉素敏感。

解題本題的關(guān)鍵，首先是理解好幾種酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，然后通過(guò)質(zhì)粒和目的基因所位于的片段上，幾種酶的切割位點(diǎn)來(lái)解決問(wèn)題。