Question

【題目】營養缺陷型菌株就是在人工誘變或自發突變后，微生物細胞代謝調節機制中的某些酶被破壞，使代謝過程中的某些合成反應不能進行的菌株。這種菌株能積累正常菌株不能積累的某些代謝中間產物，為工業生產提供大量的原料產物。以下是實驗人員利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程。回答下列問題：

（1）過程①的接種方法為______，與基本培養基（只含碳源、無機鹽、水）相比，待測培養皿中特有的成分有______。

（2）進行②過程培養時，應先將絲絨布轉印至___________上（“基本培養基”或“完全培養基”），原因是____________________________，從_____________培養基上獲得相應的營養缺陷型菌株。釆用影印法培養的優點是______________________________。

（3）為了進一步完成對初檢的營養缺陷型菌株的鑒定，實驗人員進行了如下操作：

①用接種針挑取______（填“菌落A”或“菌落B”）接種于盛有完全培養液的離心管中，28℃振蕩培養1～2天后，離心，取沉淀物用______水洗滌3次，并制成菌懸液。

②吸取1mL菌懸液加入無菌培養皿中，傾注15mL融化并冷卻至4550℃的基本培養基，待其冷凝后用記號筆在皿底劃分五個區域，標記為A、B、C、D、E。

③在劃分的五個區域上放入少量分組的氨基酸粉末（如下表所示），經培養后，觀察生長圈出現的區域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。

組別	所含氨基酸
A	組氨酸	蘇氨酸	谷氨酸	天冬氨酸	亮氨酸
B	精氨酸	蘇氨酸	賴氨酸	甲硫氨酸	苯丙氨酸
C	酪氨酸	谷氨酸	賴氨酸	色氨酸	丙氨酸
D	甘氨酸	天冬氨酸	甲硫氨酸	色氨酸	絲氨酸
E	半胱氨酸	亮氨酸	苯丙氨酸	丙氨酸	絲氨酸

在上述鑒定實驗中，發現在培養基A、D區域出現生長圈，說明該營養缺陷型菌株屬于______缺陷型。

Answer 1

【答案】稀釋涂布平板法 氨基酸 基本培養基 防止將特定營養成分帶入培養基 完全 同種菌株的接種位置相同 菌落A 無菌水 天冬氨酸缺陷型

【解析】

分析題圖：圖中首先利用稀釋涂布平板法分離細菌，然后運用“影印法”將菌種接種到兩種培養基中：基本培養基、完全培養基，在基本培養基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養基中能夠生長，據此可以選擇出氨基酸缺陷型菌株。

（1）根據過程①所得培養基中菌落的分布結果可以判斷，該過程所采用的接種方法為稀釋涂布平板法。圖示是利用影印法初檢氨基酸缺陷型菌株的過程，據此可知，與基本培養基（只含碳源、無機鹽、水）相比，待測培養皿中的特有的成分有氨基酸。

（2）為了防止將特定營養成分帶入培養基，進行②過程培養時，應先將絲絨布轉印至基本培養基上。在基本培養基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養基中能夠生長，因此從完全培養基上可獲得相應的營養缺陷型菌株。采用影印法培養的優點是同種菌株的接種位置相同。

（3）①在基本培養基中，氨基酸缺陷型菌株不能生長，而在完全培養基中能夠生長，因此圖中菌落A應該為氨基酸缺陷型菌株，則用接種針挑取菌落A接種于盛有完全培養液的離心管中，28℃振蕩培養1~2天后，離心，取沉淀物用無菌水洗滌3次，并制成菌懸液。

②加入菌懸液的無菌培養皿中應傾注15mL融化并冷卻至45-50℃的基本培養基。

③表中信息顯示：A、D區域含有、其它區域不含有的氨基酸是天冬氨酸，而實驗結果只有A、D區域出現生長圈，說明該營養缺陷型菌株屬于天冬氨酸缺陷型。