Question

【題目】“地溝油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地溝油最大的來源為城市飯店下水道的隔油池。對(duì)地溝油的處理是一個(gè)難題，用脂肪酶處理地溝油具有廣泛的應(yīng)用前景。為獲得高產(chǎn)脂肪酶的菌株，并將之用于產(chǎn)業(yè)化，某研究小組進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，應(yīng)配制以___________為唯一碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于___________培養(yǎng)基。

（2）經(jīng)過稀釋，在平板上接入0.1mL稀釋液并涂布，經(jīng)適當(dāng)時(shí)間培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此可計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小，原因可能是___________。

（3）經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)得到如下表所示的結(jié)果，為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇___________稀釋倍數(shù)的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。有同學(xué)認(rèn)為稀釋操作時(shí)，可以將1mL培養(yǎng)液加適量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，這樣可以簡(jiǎn)化步驟，省去梯度稀釋的麻煩。該方法___________(填“合理”或“不合理”)，因?yàn)?/span>___________。

（4）如果脂肪酶的產(chǎn)業(yè)化需要其活性在固定化處理時(shí)不受損失，且在多次重復(fù)使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應(yīng)選擇下表中的___________法固定化工藝。使用分泌脂肪酶細(xì)菌與固定化脂肪酶進(jìn)行生產(chǎn)，都需要適宜的___________(填序號(hào))。

①溫度 ②水 ③營(yíng)養(yǎng) ④pH

酶固定化方法	吸附法	共介結(jié)合法	包埋法
制備難易	易	難	難
酶活力損失	小	大	小
酶與載體的結(jié)合能力	較弱	強(qiáng)	強(qiáng)
成本	低	高	中
對(duì)底物和產(chǎn)物的要求	無特殊要求	無特殊要求	分子量需比較小

Answer 1

【答案】脂肪 選擇 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落 104 不合理 在做梯度稀釋之前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30~300之間 包埋 ①②④

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能劃分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基；

選擇培養(yǎng)基：（1）特點(diǎn)：培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需的微生物的生長(zhǎng)。（2）應(yīng)用：培養(yǎng)、分離出特定微生物，如養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基用于分離含有脂肪酶的細(xì)菌。

鑒別培養(yǎng)基：（1）特點(diǎn)：根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。（2）應(yīng)用：鑒別不同種類的微生物，如可用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否含有大腸桿菌。

2、微生物的計(jì)數(shù)方法：包括顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法(常用稀釋涂布平板法)。稀釋涂布平板法的理論依據(jù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落即代表一個(gè)活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋倍數(shù)至少涂布3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均值。

（1）欲分離篩選出能分泌脂肪酶的細(xì)菌，要在培養(yǎng)基中加入特定的碳源，應(yīng)配制以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基從功能上看屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）在平板上接入桸釋液并涂布，培養(yǎng)后，在平板上計(jì)數(shù)菌落，據(jù)此計(jì)算每毫升培養(yǎng)液中的活菌數(shù)。由于可能有的菌落是由2個(gè)及2個(gè)以上的細(xì)菌形成的，也可能涂布器上還殘留少量細(xì)菌，故這種計(jì)數(shù)方法得到的結(jié)果一般比實(shí)際值偏小。

（3）為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇104稀釋倍數(shù)，稀釋操作時(shí)，將1m培養(yǎng)液加通量無菌水直接稀釋至上述稀釋倍數(shù)，這種方法不合理，因?yàn)樵谧鎏荻认♂屩�前不能確定這個(gè)稀釋倍數(shù)的每個(gè)平板的菌落是否在30～300之間。

（4）包埋法固定化工藝可以在需要酶活性在固定處理時(shí)不受損失，且多次重復(fù)使用后仍能維持酶活性的穩(wěn)定。酶與細(xì)菌均需要適宜的溫度、水和PH值。