Question

【題目】異煙肼（isoniazid）又名雷米封（rimifon），是吡哆醇的結構類似物或代謝拮抗物。科研人員為了定向培育抗異煙肼的吡哆醇高產酵母菌突變株，采用梯度平板法進行了如下實驗：

①在滅菌后的培養皿中加入10 mL融化的普通培養基，皿底斜放（一邊墊起），待凝（如圖1）；

②待培養基凝固后將培養皿放平，倒上第二層含適當濃度的異煙肼的培養基（10 mL），這樣便得到異煙肼含量從一邊到另一邊逐漸升高的梯度平板（如圖2）；

③用移液管移取經誘變處理后的酵母菌細胞懸液0．1 mL到梯度平板上，進行涂布；

④將平板倒置于22℃恒溫培養箱中培養一段時間，可觀察到梯度平板上酵母菌的生長情況（如圖3）。

據分析回答：

（1）從作用來看，本研究使用的培養基屬于________培養基，為了使其能夠凝固，在配制時通常需要在培養基中加入________。

（2） 步驟①中培養基常用的滅菌方法是________，步驟③中移液管常用的滅菌方法是________。

（3）步驟③中，滴加到梯度平板上的酵母菌細胞懸液一般不超過0．1 mL的原因是________。

（4）步驟④中，培養基上接種后將平板進行倒置培養的目的是________，恒溫培養箱的溫度控制在22℃左右，其主要目的是________。

（5）根據實驗結果推測，圖3抗性菌落主要位于圖2 中________端，其具有抗藥性的主要原因是________。

Answer 1

【答案】選擇 瓊脂 高壓蒸汽滅菌 干熱滅菌 培養基表面的酵母菌細胞懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基 為酵母菌細胞的生長、繁殖提供適宜的溫度 B 酵母菌合成更高濃度的吡哆醇，以克服異煙肼的競爭性抑制

【解析】

1、培養基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養基	培養基中加入某種化學成分	根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養基	加入某種試劑或化學藥品	依據微生物產生的某種代謝產物與培養基中特定試劑或化學藥品反應，產生明顯的特征變化而設計	鑒別和區分菌落相似的微生物伊紅和美藍培養基可以鑒別大腸桿菌

2、無菌技術：

（1）關鍵：防止外來雜菌的入侵；

（2）具體操作

①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；

②將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌；

③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；

④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。

（1）該實驗所用的培養基中含有藥物，只有能抗藥物的微生物才能在該培養基上生存，因此該培養基屬于選擇培養基；為了使培養基能夠凝固，通常需要在培養基中加入凝固劑--瓊脂。

（2）培養基常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，移液管常用的滅菌方法是干熱滅菌。

（3）滴加到梯度平板上的酵母菌細胞懸液一般不超過0.1mL的原因是培養基表面的酵母菌細胞懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果。

（4）培養基上接種后將平板進行倒置培養的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基；恒溫培養箱的溫度控制在22℃左右，其主要目的是為酵母菌細胞的生長、繁殖提供適宜的溫度。

（5）根據實驗結果推測，圖3抗性菌落主要位于圖2 中B端，其具有抗藥性的主要原因是酵母菌合成更高濃度的吡哆醇，以克服異煙肼的競爭性抑制。