Question

【題目】MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ三種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC，如圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切點(diǎn)。圖3表示利用基因工程生產(chǎn)胰島素的三種途徑。圖4表示改造哺乳動(dòng)物遺傳特性的三種途徑。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。

（1）若要用如圖1和圖2中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造，構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)。在構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)的過(guò)程中需要使用哪些工具酶___________________。

（2）圖3中催化過(guò)程①的DNA連接酶的作用是促使形成_________________，導(dǎo)入受體細(xì)胞B常用方法_______________，④過(guò)程也可以培養(yǎng)到______________，再?gòu)呐囵B(yǎng)液中提取細(xì)胞代謝產(chǎn)物。

（3）圖3中導(dǎo)入受體細(xì)胞C首先使用Ca2+處理使其吸收周圍的DNA分子，之后將細(xì)胞C與圖中M溶于緩沖液中，完成轉(zhuǎn)化過(guò)程，其中用Ca2+處理的目的是________________。

Answer 1

【答案】限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶 磷酸二酯鍵 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 愈傷組織 增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性

【解析】

分析題圖：圖1質(zhì)粒中含有限制酶PstⅠ和EcoRⅠ的切割位點(diǎn)。圖2含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中EcoRⅠ酶的切割位點(diǎn)位于目的基因中。圖3中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，③表示早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)，④表示植物組織培養(yǎng)，⑤表示微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

（1）含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，其中EcoRⅠ酶的切割位點(diǎn)位于目的基因中，因此構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不能用EcoRⅠ酶切割，應(yīng)該用限制酶PstⅠ、MseⅠ進(jìn)行切割，則對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行改造時(shí)，應(yīng)該將限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)改造成限制酶MseⅠ的切割位點(diǎn)。因此，首先需要用限制酶EcoRⅠ切割，其次需要用DNA聚合酶將相應(yīng)的脫氧核苷酸序列連接上去，最后再用DNA連接酶連接形成限制酶MseⅠ的切割位點(diǎn)。所以在構(gòu)建新的限制酶切位點(diǎn)的過(guò)程中需要使用限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA連接酶等工具酶。
（2）DNA連接酶的作用是促使形成磷酸二酯鍵，導(dǎo)入受體細(xì)胞B（萵苣）常用方法為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，④過(guò)程表示植物組織培養(yǎng)，可以培養(yǎng)到愈傷組織，再?gòu)呐囵B(yǎng)液中提取代謝產(chǎn)物，原因是細(xì)胞代謝強(qiáng)、增殖快。
（3）導(dǎo)入受體細(xì)胞C（大腸桿菌）首先使用Ca2+處理，目的是增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，使其容易吸收周圍的DNA分子，之后將細(xì)胞C與圖中M（基因表達(dá)載體）溶于緩沖液中，完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。