Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。tetR表示四環素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、HindⅢ、SmaI直線所示為三種限制酶的酶切位點。據圖回答：

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_________________限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含____________________的培養基上進行。

（2）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是____________。

（3）過程①可采用的操作方法是______________。

（4）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用___________技術。

Answer 1

【答案】Hind Ⅲ、BamH I 氨芐青霉素 啟動子 顯微注射 抗原-抗體雜交

【解析】

1、分析題圖：圖中質粒包括四環素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因、啟動子、復制原點，以及兩個限制酶切點，并且兩個限制酶切點的位置均在四環素抗性基因上；目的基因上有三個限制酶切點，與質粒對照，共有的是BamHI、HindIII。

2、圖中①表示目的基因導入受體細胞，②表示通過胚胎移植的方式將早期胚胎移植到代孕母牛體內。

（1）由圖中信息可知，載體上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位點，目的基因上也有它們的酶切位點，應用此2種酶切。當人乳鐵蛋白基因和質粒連接成重組質粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養基上進行。

（2）能讓目的基因開始表達的是啟動子，啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度。

（3）將目的基因導入到動物受精卵中常用顯微注射法。

（4）一般檢測目的基因是否表達里用抗原-抗體雜交的方法。