Question

【題目】20世紀以來，生物工程迅猛發展，人們應用生物工程技術已獲得了多種需要的生物新品種或新產品。請據圖回答下列問題：

（1）圖中（I）是______________，在構建重組質粒的過程中，保證（I）與質粒具有相同黏性末端的是酶A、酶B中的_______________。

（2）在將（I）導入受體細胞之前需構建基因表達載體（重組質粒），其目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠______________。如果（II）受體細胞是大腸桿菌細胞，最常用的轉化方法是________________，原理是________________。

（3）（II）、（III）的過程中要對受體細胞進行檢測，目的是判斷目的基因是否可以穩定維持和表達其遺傳性狀。若要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，可用_______________技術；若要檢測目的基因是否表達出蛋白質，可用___________________技術。

（4）寫出質粒作為運載體的條件_______________、__________________(兩項）。

Answer 1

【答案】 目的基因 酶A 表達和發揮作用 Ca離子轉化法 使其成為感受態細胞，容易吸收外源DNA 分子雜交 抗原—抗體雜交 一個至多個限制酶切位點 有標記基因

【解析】試題分析：根據圖解流程分析可知，酶A為限制酶，識別并切割含目的基因的供體DNA以及質粒，以獲得具有相同黏性末端的目的基因（I）和質粒；酶B為DNA連接酶，將切出的目的基因與質粒重新連接形成重組質粒（II）；再將重組質粒導入受體細胞，得到含轉基因的細胞，最后經過篩選，獲得能穩定遺傳并表達的轉基因細胞，經體外培養提取所需的轉基因表達產物。

（1）根據前面的分析可知，圖中（I）是目的基因，在構建重組質粒的過程中，保證（I）與質粒具有相同黏性末端的是酶A——限制酶。

（2）在將目的基因導入受體細胞的關鍵是使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。如果（II）受體細胞是大腸桿菌細胞，最常用的轉化方法是鈣離子轉化法，其原理是利用鈣離子處理大腸桿菌，使其成為感受態細胞，容易吸收外源DNA。

（3）對接受目的基因的受體細胞進行檢測，目的是判斷目的基因是否可以穩定維持和表達其遺傳性狀。若要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，可用分子雜交技術；若要檢測目的基因是否表達出蛋白質，可用抗原—抗體雜交技術。

（4）質粒作為運載體的條件：一是它含有一個至多個限制酶切位點；二是含有標記基因；三是能在宿主細胞內穩定保持和復制；四是對宿主細胞沒有危害性。