Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）銹去津是一種含氮的有機化合物，它是廣泛使用的除草劑之一。銹去津在土壤中不易降解，為修復被其污染的土壤，按下面程序選育能降解銹去津的細菌（目的菌）。已知銹去津在水中溶解度低，含過量銹去津的固體培養基不透明。

回答下列問題：

（1）為選取能降解銹去津的細菌，應選取____土壤樣品加____（A．蒸餾水 B．清水 C．生理鹽水 D．無菌水）制備成土壤浸出液。

（2）本實驗中將細菌接種到固體培養基所用的接種方法為____，接種后的培養皿倒置后置于____中培養一段時間后，觀察菌落特征。

（3）測得A～C瓶中三類細菌的最大密度如下圖所示：

由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養的目的是____并提高其密度；甲類細菌密度迅速降低的主要原因是____；

（4）圖中固體培養基上，____菌落即為目的菌落。

（二）綠色熒光蛋白基因（GFP）被發現以來，一直作為一個監測完整細胞和組織內基因表達及蛋白質位置的理想標記。回答下列問題：

幾種限制酶識別序列及切割位點表

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—T TCGA，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—C TGCA，則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶____，對____進行切割。

（2）重組質粒A常通過 ____法導入到豬胎兒成纖維細胞。

（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可在熒光顯微鏡下觀察的表達。圖中綠色熒光蛋白轉基因克隆豬中GFP既是____，也是____。

（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到多項現代生物技術，圖中⑤⑥⑦過程屬于____技術，⑨過程通常選用____個細胞以上的早期胚胎進行移植。

Answer 1

【答案】使用過銹去津 D 涂布接種法 恒溫培養箱 篩選或選擇目的菌 培養液中缺少甲類細菌可利用的氮源（或有氧條件抑制了甲類細菌的生長） 有透明帶 HindⅢ和PstⅠ Ti質粒和目的基因（或Ti質粒） 顯微注射 目的基因 標記基因 核移植 8

【解析】

（一）選擇培養基：培養基中加入某種化學物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長。圖中從A瓶到C瓶液體培養的目的是擴大培養，篩選目的菌。

（二）圖中①表示目的基因獲取，②表示用限制酶切割質粒，③表示基因表達載體構建，④表示將目的基因導入受體細胞，⑤表示將豬胎兒成纖維細胞提取細胞核，⑥表示將豬卵母細胞去除細胞核，⑦表示核移植，⑧表示動物細胞培養，⑨表示胚胎移植。

（一）

（1）為選取能降解銹去津的細菌，將銹去津作為唯一氮源，選取使用過銹去津土壤樣品加無菌水制備成土壤浸出液。

（2）本實驗中使用的是涂布接種法，接種后的培養皿倒置后置于恒溫培養箱中培養。

（3）由圖可知從A瓶到C瓶，甲類細菌變少，乙丙細菌增多，以此篩選目的菌并提高其密度；甲類細菌密度迅速降低的主要原因是培養液中缺少甲類細菌可利用的氮源。

（4）菌落有透明帶，說明銹去津被細菌分泌的酶降解，可篩選出目的菌。

（二）

（1）從圖示可知，GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是TTCGA，是限制酶HindⅢ酶的切割位點；N端伸出的核苷酸的堿基序列是CTGCA，是限制酶PstⅠ切割位點；則在構建含該GFP的重組質粒A時，應選用限制酶HindⅢ和PstⅠ切割目的基因和質粒，再用DNA連接酶把目的基因和運載體相連。

（2）重組質粒A常通過顯微注射法導入到豬胎兒成纖維細胞。

（3）據圖可知最終要得到綠色熒光豬，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成綠色熒光蛋白，可據此檢測GFP是否成功導入細胞，作為標記基因。

（4）綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程中涉及到基因工程、核移植和胚胎移植，圖中⑤⑥⑦過程屬于核移植技術，⑨過程通常選用8個細胞以上的早期胚胎進行移植。