Question

【題目】在生物的生長發育過程中，基因是選擇性表達的。某真核生物，要想獲得極為稀少的mRNA及其克隆，可以用下圖所示的差異雜交法。Poly（A)是指位于mRNA上的150-200個腺苷酸殘基。請回答下列問題。

（1）利用表達目的mRNA的細胞獲得放射性標志的探針時，需要用________酶，可以用_______作為引物。

（2）用羥基磷灰石柱層析法，回收______________（填“未雜交的32P標記的單鏈DNA”或“雜交分子”），用構建________（填“基因組”或“cDNA”）文庫。

（3）在生物的生長發育過程中，由于基因選擇性表達導致細胞__________，該過程的結果使多細胞生物體中的細胞趨向____________，有利于提高各種生理功能的效率。

（4）若用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達目的mRNA細胞中獲得的單鏈DNA雜交，可能形成雜合雙鏈區和游離的單鏈區，原因是_________________________________________________________。

Answer 1

【答案】（1）逆轉錄酶 Poly （A)

（2）未雜交的32P標記的單鏈DNA cDNA

（3）分化 專門化

（4）DNA分子中含有內含子、非編碼區等序列，mRNA分子中沒有互補的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以出現游離單鏈區。DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有互補的堿基序列，互補堿基序列就會結合在一起，形成雜合雙鏈區。

【解析】

試題分析：（1）依題意并結合圖示分析可知：利用表達目的mRNA的細胞獲得放射性標志的探針時，是以總Poly（A)—mRNA為模板通過反轉錄合成，因此需用逆轉錄酶。由題意“Poly （A)是指位于mRNA上的150-200個腺苷酸殘基”可知，可以用Poly （A) 作為引物。

（2）圖示中未雜交的32P標記的單鏈DNA是以目的mRNA為模板反轉錄合成，只含有某真核生物的部分基因，所以在構建基因文庫時，用羥基磷灰石柱層析法，回收的是未雜交的32P標記的單鏈DNA，所構建的基因文庫屬于cDNA文庫。

（3）在生物的生長發育過程中，由于基因選擇性表達導致細胞分化。細胞分化的結果使多細胞生物體中的細胞趨向專門化，有利于提高各種生理功能的效率。

（4）DNA分子中含有內含子、非編碼區等序列，mRNA分子中沒有與之互補的堿基序列，仍然為兩條游離的單鏈，所以用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達目的mRNA細胞中獲得的單鏈DNA雜交，會出現游離單鏈區；DNA分子中含有外顯子序列，mRNA中具有與之互補的堿基序列，互補堿基序列就會結合在一起，形成雜合雙鏈區，因此用NaOH水解除去mRNA獲得的分子與不表達目的mRNA細胞中獲得的單鏈DNA雜交，會形成雜合雙鏈區。