Question

【題目】蘋果樹腐爛病由真菌感染引起，是限制蘋果產量的重要因素之一，目前該病以化學防治為主。為了開發生物防治的途徑，研究者擬從土壤中分離篩選出能抑制蘋果樹腐爛病菌生長的芽孢桿菌。實驗流程如圖1：

（1）分離篩選土壤中的芽孢桿菌
圖1中①取5g土壤加入____________ mL無菌水中充分震蕩得到10-1的土壤懸液。進行系列稀釋后用___________法進行接種，每個濃度重復3次。將接種后的平板________，以防止冷凝水滴落造成污染。37℃條件下培養24小時，根據__________特征鑒別出芽孢桿菌并進一步純化。

（2）篩選能抑制蘋果樹腐爛病菌生長的芽孢桿菌

圖1中，應取直徑為5mm的____________的菌落移置于A處，B處接種______。培養3～5天，測量并計算抑菌率。篩選出抑菌率最高的菌株，抑菌效果如圖2。請將抑菌率的計算公式補充完整：抑菌率（%）= _____ /(D-5)×100%（用圖2中的字母表示）

（3）測定篩選出的抗菌菌株對感染了蘋果樹腐爛病菌枝條的抑菌率
實驗過程如表1，請在空白處補充相關內容。_______

在相同且適宜的條件下培養，7天后測量并計算抑菌率。實驗結果如表2。

由表中數據可知：發酵原液對蘋果樹腐爛病菌有明顯的抑制作用。依據是隨著發酵濾液稀釋倍數的不斷增加，__________。

（4）請你說出與化學防治相比，生物防治的優勢是__________。

Answer 1

【答案】45 涂布平板 倒置 菌落 蘋果腐爛病菌 芽孢桿菌 D-d 健康 不同稀釋倍數的抗菌菌株發酵濾液 病斑面積不斷擴大，抑菌率逐漸降低 降低環境污染；減少化學藥劑在果實中的殘留；對其他生物擾動小

【解析】

自然界中目的菌株的篩選的依據是根據它對生存環境的要求，到相應的環境中去尋找．實驗室中目的菌株的篩選的原理是利用選擇培養基人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。

微生物的滅菌方法主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌和灼燒滅菌，接種方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法。

（1）要得到10-1的土壤懸液，圖1中①取5g土壤，則應該加入45 mL無菌水中充分震蕩。再繼續進行梯度稀釋，通過稀釋涂布平板法進行接種，每個濃度重復3次；避免冷凝水滴落造成污染，故將接種后的平板倒置放在培養箱中培養。37℃條件下培養24小時，根據菌落特征鑒別出芽孢桿菌并進一步純化。

（2）通過實驗設計的對照原則和單因素變量原則，在圖1中，對照組的A處只接種蘋果腐爛病菌，實驗組在A處接觸了蘋果腐爛病菌的四周接種B芽孢桿菌，培養3～5天，測量并計算抑菌率。通過圖2可的對照組，可測定A處蘋果腐爛病菌的直徑，且接種時蘋果腐爛病菌的直徑為5mm，則蘋果腐爛病菌的生長直徑為D-5，實驗組在A接種蘋果腐爛病菌的四周接種了芽孢桿菌，且有一定的抑菌效果，抑制蘋果腐爛病菌直徑的長度為D-d，故抑菌率（%）= (D-d) /(D-5)×100%。

（3）通過實驗設計的對照原則和單因素變量原則以及無關變量適宜且相同分析表1，可知選材應該選取“紅富士”品種健康的果樹枝條進行消毒和打孔。通過單因素變量原則可知，對照組涂抹等量的無菌水，則實驗組應該涂抹等量的篩選出來的具有抗菌作用的芽孢桿菌。通過表2中數據分析可知：隨著發酵濾液稀釋倍數的不斷增加，病斑面積不斷擴大，抑菌率逐漸降低，故發酵原液（即不稀釋的芽孢桿菌菌液）對蘋果樹腐爛病菌有明顯的抑制作用。

（4）生物防治與化學防治相比，生物防治具有降低環境污染；減少化學藥劑在果實中的殘留；對其他生物擾動小等的優勢。