Question

【題目】內皮祖細胞能分化為血管內皮細胞，促進血管新生，其損傷會導致嚴重的心血管疾病。為探究黃芪多糖（APS）對內皮組細胞的保護作用，進行了以下實驗。

（1）從血液中直接分離獲得內皮祖細胞，在37℃恒溫培養箱中進行培養，通入的空氣應含____________以維持pH穩定。

（2）實驗分組及處理

第1組：在EGM-2培養液中培養48h。

第2組：在EGM-2培養液中培養24h后，再加入1mg/mL脂多糖（LPS）繼續培養24h。（加入LPS的目的是誘導內皮祖細胞的損傷）

第3組：在EGM-2培養液中加入0.8mg/mL APS培養24h后，加入______繼續培養24h。

（3）細胞增殖能力檢測

將上述處理好的各組細胞分別接種在多孔板中繼續培養，測定96h內細胞數量的變化。（用OD值表示，數值越大表示細胞數量越多）

時間 組別 OD值	0h	24h	48h	96h
1	0.61	0.85	1.55	2.02
2	0.67	0.72	1.31	1.65
3	0.52	0.81	1.50	1.79

據此得出的結論是_______________。

（4）miRNA檢測

miRNA與靶基因mRNA配對導致mRNA無法參與_____過程，從而實現對靶基因表達的調控。研究人員提取細胞中的總RNA，在_________酶的作用下合成cDNA，然后進行定量PCR，計算各種miRNA的含量，結果如下圖所示：

推測LPS引起細胞損傷的原因是_________。APS在一定程度上能減輕這種損傷。

Answer 1

【答案】5%CO2 1mg/mL LPS APS對內皮祖細胞有一定的保護作用 翻譯 逆轉錄 LPS導致細胞中miRNA-146a含量升高，抑制了部分基因的表達，miRNA-424和miRNA-145含量降低，解除了對另一部分基因表達的抑制

【解析】

1、分析實驗的自變量和因變量，自變量是有無LPS，因變量是能否對細胞起著保護作用。

2、miRNA的作用是和mRNA配對后阻止了基因表達的翻譯過程。

（1）動物細胞培養需要含有5%CO2以維持pH穩定。

（2）該實驗的目的是探究APS對內皮組細胞的保護作用，而LPS誘導內皮祖細胞的損傷，所以在第三組的培養液中需要加入0.8mg/mL APS培養后加入1mg/mL脂多糖（LPS）觀察細胞的受損情況，即細胞增殖能力。

（3）實驗結論：加入APS后第三組的OD值比第二組大，說明APS對內皮祖細胞有一定的保護作用，減緩了LPS對內皮祖細胞的損傷。

（4）miRNA與靶基因mRNA配對導致mRNA不能與核糖體結合，不能參與翻譯過程，以RNA為模板合成cDNA的過程稱為逆轉錄，需要逆轉錄酶的參與；從圖中看出和第一組比較第二組中miRNA-146a的量明顯上升，而miRNA-424和miRNA-145降低，所以推測LPS引起細胞損傷的原因是LPS導致細胞中miRNA-146a含量升高，抑制了部分基因的表達，miRNA-424和miRNA-145含量降低，解除了對另一部分基因表達的抑制。