Question

【題目】回答下列有關基因表達和生物工程問題．
如圖1所示為用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因（4kb，lkb=1000個堿基對長度）及其上DNA片段示意圖．
如圖2所示為三種質粒示意圖．圖中AP為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因．EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割的位點與復制原點的距離．復制原點是在基因組上復制起始的一段序列，是指質粒在受體細胞中復制時的起點．

（1）基因工程是生物工程核心技術．下列是分子實驗室中構建產生胰島素基因工程菌的部分操作，正確流程是 ． （用題中編號排序）
①篩選含有胰島素基因的受體細胞 ②胰島素基因與運載體重組
③重組DNA導入受體細胞 ④獲取胰島素基因
（2）片段D為目的基因中的某一片段，有關敘述正確的是（多選）．
A.若圖中的ACT能決定一個氨基酸，則ACT可稱為一個密碼子
B.DNA連接酶作用于②處，DNA解旋酶作用于①處
C.若只用片段D中的3個堿基對，則可以排列出43種片段
D.同一脫氧氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間依次經過“一脫氧核糖﹣磷酸基﹣脫氧核糖﹣”連接
（3）圖2中質粒A、質粒C能否作為目的基因運載體最理想的質粒？（能/否）．為什么，
請說明理由 ．
（4）用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質粒B形成的重組質粒（EcoRⅠ在目的基因和質粒上的酶切位點如上兩圖所示），則進行電泳后觀察可出現長度為1.1kb和kb，或者分別是kb和kb兩個片段．（重組質粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計）．

Answer 1

【答案】
（1）④②③①
（2）B,D
（3）否；質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制
（4）5.6；3.1；3.6
【解析】解：（1）基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲取；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與表達．因此，正確流程是④獲取胰島素基因（獲取目的基因）、②胰島素基因與運載體重組（構建基因表達載體）、③重組DNA導入受體細胞（將目的基因導入受體細胞）、①篩選含有胰島素基因的受體細胞（目的基因的檢測與表達）．（2）A、密碼子位于mRNA上，因此DNA上的ACT不能成為密碼子，A錯誤；
B、DNA連接酶作用于②磷酸二酯鍵處，DNA解旋酶作用于①氫鍵處，B正確；
C、若只用片段D中的3個堿基對，則可以排列出3×2×1=6種片段，C錯誤；
D、同一脫氧氧核苷酸鏈中相鄰的兩個堿基之間依次經過“一脫氧核糖﹣磷酸基﹣脫氧核糖﹣”連接，D正確．
故選：BD．（3）質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制．因此，圖中質粒A、質粒C不能作為目的基因運載體最理想的質粒．（4）由于目的基因與質粒B可能發生正向連接，也可能發生反向連接，因此用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質粒B形成的重組質粒，進行電泳后觀察可出現長度為0.8﹣0.7+1=1.1kb和5.6kb，或者分別是0.8﹣0.7+3=3.1kb和（1.1+5.6）﹣3.1=3.6kb兩個片段．
所以答案是：（1）④②③①（2）BD（3）否 質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制（4）5.6 3.1 3.6（3.1和3.6可以更換位置）
【考點精析】掌握基因工程的原理及技術是解答本題的根本，需要知道基因工程的原理是利用DNA重組技術．