Question

【題目】【生物——選修3:現代生物科技專題】為增加油菜種子的含油量，科研人員將轉運肽基因與酶D基因相連，導人油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。

（1）研究人采用PCR技術獲取酶D基因和轉運肽基因，該技術是利用 的原理，使相應基因呈指數增加。所含三種限制酶（XbaI、ClaI、SacI）的切點如圖所示，則用 和

（2）將上述融合基因插人上圖所示Ti質粒的 中，構建基因表達載體并導人農桿菌中。為了獲得含融合基因的單菌落，應進行的操作是 。隨后再利用液體培養基將該單菌落振蕩培養，可以得到用于轉化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時間，此過程的目的是 ，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，依據 的原理，可將其培育成轉基因油菜植株。

（4）用 法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達。

Answer 1

【答案】（1）DNA雙鏈復制 ClaⅠ DNA連接

（2）T-DNA（1分） 將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體培養基上培養

（3）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞 細胞具有全能性

（4）抗原—抗體雜交

【解析】（1）PCR技術的原理是DNA雙鏈復制。提取轉運肽基因需要XbaI和ClaI，提取酶D基因需要ClaI和SacI，其中由ClaI切割形成的基因末端是相同的，故用ClaⅠ和DNA連接酶處理兩個基因后，可得到兩基因相連的融合基因。

（2）利用農桿菌轉化法導入目的基因，需要將目的基因插入農桿菌的Ti質粒的T-DNA中，所以構建基因表達載體需要將上述的融合基因插入Ti質粒的T-DNA中。重組Ti質粒上面有四環素抗性基因，所以篩選含有融合基因的單菌落需要將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體培養基上培養。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞。進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞植物組織培養技術培育成轉基因油菜植株，該過程依據的原理是植物細胞具有全能性。

（4）基因表達的產物是蛋白質，故用抗原—抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達。