Question

【題目】科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療．其技術流程如下圖1：

（1）步驟①中，在核移植前應去除卵母細胞的 ．

（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為 ．

（3）步驟③中，需要構建含有干擾素基因的 ．構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取 作為引物．對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶的組合為 ．

（4）將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發 色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用 的方法．

Answer 1

【答案】（1）細胞核

（2）ES細胞具有全能性

（3）基因表達載體 B和C HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（4）綠 抗原﹣抗體雜交

【解析】

試題分析：分析圖1：①表示核移植過程；②表示早期胚胎培養過程；③表示將目的基因導入ES細胞．

分析圖2：該DNA片段含有四種限制酶識別序列和切割位點，其中SamⅠ酶的識別序列和切割位點位于目的基因上．

分析圖3：圖3為質粒結構示意圖，該質粒含有2個標記基因（紅色熒光標記基因和綠色熒光標記基因）．

解：（1）核移植是將體細胞核移植到去核的卵母細胞中，所以實驗前要去除卵母細胞的細胞核．

（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有全能性．

（3）步驟③是將目的基因導入ES細胞，該過程之前需要構建基因表達載體；DNA復制只能從5’到3’，因此構建前利用PCR技術擴增干擾素基因時，可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物．由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ．

（4）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發綠色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用抗原﹣抗體雜交法．

故答案為：

（1）細胞核

（2）ES細胞具有全能性

（3）基因表達載體 B和C HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（4）綠 抗原﹣抗體雜交