Question

【題目】肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌．研究人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現表達，發現肺癌細胞的增殖受到抑制,該基因工程技術基本流程如圖1,研究發現let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2,請回答下列問題：

（1）進行圖1過程①時，需用______酶切開載體以插入let-7基因．載體應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動let-7基因轉錄，該部位稱為_____________．

（2）圖1中重組載體導入肺癌細胞的常用方法是_____________

（3）根據圖2分析，可從細胞中提取______進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄．肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中______含量減少引起的，其實質是遺傳信息表達時______過程受阻，導致RAS基因沉默．

Answer 1

【答案】

（1）限制性核酸內切（或限制） 啟動子

（2）顯微注射法

（3）let-7基因的RNA （miRNA） RAS蛋白 翻譯

【解析】

（1）過程①表示基因表達載體的構建，在該過程中需要用限制性核酸內切酶（簡稱限制酶）對載體進行切割，以便于目的基因的插入；啟動子是一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識別和結合的位點，RNA聚合酶結合到該位點，可驅動轉錄過程．

（2）目的基因導入動物細胞中一般采用顯微注射法．如果肺癌細胞中導入重組載體，則肺癌細胞的增殖將受到影響，因此可以通過對細胞進行培養觀察細胞增殖的速率，并與正常肺癌細胞的增殖速率進行比較得出相應結論．

（3）判斷目的基因是否在受體細胞中轉錄，可用分子雜交技術來檢測，從細胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段進行雜交．根據題中信息“肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發肺癌”知，導入let-7基因后，肺癌細胞的增殖受到抑制；據圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達的機理是：let-7基因轉錄產物miRNA與RAS基因轉錄產物RAS mRNA結合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制．