Question

【題目】運用轉基因技術，將奶牛細胞中編碼凝乳酶的基因轉移到大腸桿菌細胞中，達到大規模生產凝乳酶的目的。如圖表示用作運載體的質粒和目的基因所在DNA片段。下列操作與實驗目的不符的是（ ）

A.用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA連接酶構建基因的表達載體

B.用含氨芐青霉素的培養基篩選出的即為導入目的基因的細菌

C.可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞

D.用Ca2+處理大腸桿菌使其易于轉化

Answer 1

【答案】B

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、由于EcoRI會破壞外源DNA中的目的基因，所以用限制酶BamHI、PstI和DNA連接酶構建基因的表達載體，A正確；
B、在形成重組質粒時，破壞了抗四環素基因，但抗氨芐青霉素基因完好，因此成功導入重組質粒的理想大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養基上能正常生長，在含四環素的培養基上不能正常生長，所以只用含氨芐青霉素的培養基篩選出的不一定為導入目的基因的細菌，也可能是導入普通質粒的細菌，B錯誤；
C、可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞，C正確；
D、將目的基因導入微生物細胞時，常用Ca2+處理細胞，使之成為易于吸收周圍環境中DNA分子的感受態細胞，D正確。
故選B。