Question

【題目】將醋酸菌突變體中與耐酸有關的ALDH基因導入優良醋酸菌中，選育出高發酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生產。請分析回答下列問題：

(1)對含有ALDH基因的DNA與質粒用同種限制酶切割后，通過________酶連接形成重組質粒。為獲得耐酸的醋酸菌，用________法接種于含高濃度醋酸的培養基進行篩選。將篩選純化的菌種用________的方法長期保存。

(2)下圖表示溫度和乙醇濃度對該醋酸菌產酸量的影響。

①醋酸菌能將乙醇轉變為________，再將其轉變為醋酸。

②研究不同酒精濃度下的最高產酸量時，最好把溫度控制為________℃

③酒精發酵后通過出料口檢測酒精濃度，將發酵液中酒精濃度調節到4%左右才接種醋酸菌，較高的酒精濃度會使產酸量下降，不適宜接種，原因是_________________________。

(3)為檢測發酵過程中醋酸菌數量，將1 mL發酵液稀釋100倍后，分別取0.1 mL稀釋菌液均勻涂布在4個平板上經適當培養后，4個平板上的菌落數分別為24、139、140、141，據此可得出每毫升發酵液中的活菌數為________個/mL。

Answer 1

【答案】 DNA連接 平板劃線(稀釋涂布平板) 甘油管藏 乙醛 35(30～35) (較)高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長和代謝 1.4×105

【解析】試題分析：本題考查微生物的培養、分離、基因工程，考查對微生物培養、分離方法和基因工程工具的理解。解答此題，可根據圖中坐標確定醋酸菌產酸的適宜溫度和酒精度，根據實驗目的確定實驗的自變量、無關變量。

(1)對含有ALDH基因的DNA與質粒用同種限制酶切割后，通過DNA連接酶連接形成重組質粒。篩選耐酸的醋酸菌，可將受體菌用平板劃線(稀釋涂布平板)法接種于含高濃度醋酸的培養基進行篩選。將篩選純化的菌種用甘油管藏的方法長期保存。

(2)①醋酸菌能將乙醇轉變為乙醛，再將其轉變為醋酸。

②研究不同酒精濃度下的最高產酸量時，溫度為無關變量，應保持適宜溫度，最好把溫度控制為35(30～35)℃。

③較高的酒精濃度(較)會抑制醋酸菌的生長和代謝，會使產酸量下降。

(3)計算每毫升發酵液中的活菌數，應選擇菌落數為30～300的培養基進行計數，培養基上的平均菌落數為（139+140+141）/3=140，則每毫升發酵液中的活菌數為140÷0.1×100=1.4×105個/mL。