Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，抗HPV的單克隆抗體可以準確檢測出HPV，從而及時監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生，以下是以HPV衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體的過程，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）單克隆抗體制各過程中涉及的細胞工程技術(shù)有____________________，單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑，在診斷的應(yīng)用上具有__________________的優(yōu)點。

（2）設(shè)法將B淋巴細胞和小鼠骨髓瘤細胞融合，常用的生物誘導(dǎo)因素是__________；雜交瘤細胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細胞相比具有的特點是____________________。

（3）雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，對于抗體檢測呈_________性的雜交瘤細胞應(yīng)進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細胞到3~10個/mL,每孔加入細胞稀釋液________mL（填“0．1”“1”或“10”），使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）由上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體，理由是_______________________。

（5）科學(xué)家從某些無限增殖細胞的細胞質(zhì)中分離出了無限增殖調(diào)控基因（prG），該基因能激發(fā)動物細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了更多的思路。除本題描述的一種制備單克隆抗體技術(shù)外，請再簡要寫出一種制備單克隆抗體的思路：_________________________。

Answer 1

【答案】動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合 準確、高效、簡易、快速 滅活病毒 染色體數(shù)目加倍 陽 0.1 小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應(yīng) 通過基因工程向漿細胞中導(dǎo)入prG（或：利用核移植技術(shù)將漿細胞的細胞核移植到去核的無限增殖細胞中）

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；（2）得到相應(yīng)的B淋巴細胞；（3）將小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選；（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生長（這種雜種細胞的特點是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一的抗體）（5）對上述雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細胞；（6）最后，將雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）單克隆抗體制備過程中涉及的細胞工程技術(shù)有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合。單克隆抗體最廣泛的用途是用作診斷試劑，具有準確、高效、簡易、快速等優(yōu)點。

（2）細胞融合的誘導(dǎo)的因素有化學(xué)因素，如聚乙二醇；生物因素，如滅活病毒，物理因素，如電激。因為雜交瘤細胞含有雙親的遺傳物質(zhì)，故雜交瘤細胞中染色體數(shù)目與普通淋巴細胞相比具有的特點是染色體數(shù)目加倍。

（3）對于抗體檢測呈陽性的雜交克隆應(yīng)盡早進行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀釋法，即稀釋細胞到3～10個細胞/mL，每孔加入細胞稀釋液0.1mL，使每個孔內(nèi)不多于一個細胞，達到單克隆培養(yǎng)的目的。

（4）因為小鼠形成的抗體對人體來說是抗原，存在著排異反應(yīng)，故上述過程生產(chǎn)出的單克隆抗體不能直接用于人體。

（5）可以利用基因工程技術(shù)將無限增殖調(diào)控基因（prG）分離出來再導(dǎo)入到漿細胞中，或者利用細胞核移植技術(shù)將漿細胞的細胞核移入到含有prG基因的細胞質(zhì)中，獲得重組細胞，最終獲得單克隆抗體。