Question

【題目】為實現目的基因與運載體結合，以便在大腸桿菌中大量表達相應的蛋白質，研究人員進行了如圖所示操作。請分析回答下列問題：

（1）如圖表示用BamH I切割含目的基因的__________，質粒經相同限制酶處理后，經 ________酶的作用獲得a，a稱作_________。

（2）將a與感受態大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有________的培養基上。質粒中抗氨芐青霉素基因稱為______，在篩選過程起作用。若要證明培養基是否符合實驗要求，培養基上需接種________的感受態大腸桿菌，培養后不出現菌落則培養基合格。

（3）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過_________相連，已知堿性磷酸酶能除去核苷酸末端的5’磷酸，構建a的過程中用該酶處理質粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是___________。

（4）如果要檢測目的基因是否成功表達，可采用________________的方法。

Answer 1

【答案】

（1）DNA片段（1分） DNA連接酶（1分） 基因表達載體（重組質粒）（1分）

（2）氨芐青霉素 標記基因 未經質粒混合

（3）磷酸二酯鍵 防止質粒自我連接

（4）抗原—抗體雜交

【解析】

（1）圖表示用BamHI為限制性內切酶，能識別特定的堿基序列，切割含目的基因的DNA片段，質粒經相同限制酶處理后，形成的黏性末端相同，經DNA連接酶酶的作用獲得基因表達載體，也叫重組質粒．

（2）由于質粒中含有標記基因抗氨芐青霉素基因，故將重組質粒與感受態大腸桿菌混合后，混合物應接種在含有氨芐青霉素的培養基上．在篩選過程起作用，導入重組質粒的大腸桿菌能正常生活，而未導入重組質粒的大腸桿菌則不能在含氨芐青霉素的培養基上生活．若要證明培養基是否符合實驗要求，需設置對照試驗，即培養基上需接種未經質粒混合的感受態大腸桿菌，培養后不出現菌落則培養基合格。

（3）DNA分子中，一條鏈中的兩個核苷酸通過磷酸二酯鍵相連；構建a的過程中用該酶處理質粒，但目的基因不用堿性磷酸酶處理，這樣做的目的是使它們形成的黏性末端不同，防止質粒自我連接。

（4）檢測目的基因是否成功表達，須提取培養后大腸桿菌的總蛋白，通過抗原--抗體雜交試驗，用相應抗體檢測。