Question

【題目】 血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2或CO2的運輸。請根據血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實驗流程補充完整：A為________________，B為______________。凝膠色譜法是根據__________________來分離蛋白質的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除________，洗滌次數過少，無法完全除去。

（3）在洗脫過程中加入物質的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7．0)的目的是_____________________________如果紅色區帶______________，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對分子質量的大小 雜蛋白(或血漿蛋白) 能夠準確模擬生物體內的生理環境，保持體外的pH和體內的一致，同時還可加速樣品在凝膠柱中的流動 均勻一致地移動

【解析】

1、血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：
（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放。
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。
（3）純化：調節緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質。
（4）純度鑒定：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
2、分析題圖：A表示血紅蛋白的釋放，B表示樣品的加入和洗脫。

（1）樣品處理和粗分離過程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以A表示血紅蛋白的釋放。粗分離得到的蛋白質可用凝膠色譜法進行純化，其中B表示樣品的加入和洗脫。凝膠色譜法的原理是分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內部，路程長，流動慢。即凝膠色譜法是根據相對分子質量的大小來分離蛋白質的有效方法。
（2）洗滌紅細胞的目的是去除雜質蛋白。
（3）磷酸緩沖液（pH為7.0）能夠準確模擬生物體內的生理環境，保持體外的pH和體內的一致，同時可加速樣品在凝膠柱中的流動。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻一致地移動。