Question

【題目】如圖為某種質粒表達載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tetR為四環素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點．已知目的基因的兩端分別包括有EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點．據圖回答：
（1）將含有目的基因的DNA與質粒表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有：目的基因﹣載體連接物、、三種．圖中ampR和tetR可以作為質粒表達載體的基因，其目的是為了鑒別 ．
（2）目的基因表達時，RNA聚合酶識別和結合的位點是啟動子，其合成的產物是 ．
（3）在上述實驗中，為了防止目的基因和質粒表達載體在酶切后產生的末端發生任意連接，酶切時應選用的酶是 ．
（4）若用第一小問的3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗．之后將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是；若接種到含青霉素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是 ．

Answer 1

【答案】
（1）載體﹣載體連接物；目的基因﹣目的基因連接物；標記；受體細胞中是否含有目的基因
（2）mRNA
（3）EcoRI和BamHI
（4）載體﹣載體連接物；目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【解析】解：（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現3種連接結果，即目的基因自身連接形成的連接物，載體自身連接形成的連接物和重組質粒，要通過篩選、純化才能選出符合要求的DNA．圖中ampR和tetR可以作為質粒表達載體的標記基因，其目的是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因．（2）載體自身形成的連接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四環素的特點，其他連接物中tetR基因被限制性內切酶破壞，不再具有抗四環素的特點；在整個操作過程中，ampR基因保持完整，載體（質粒）自身連接形成的連接物和目的基因﹣載體連接物（重組質粒）都具有抗青霉素的特性．（3）RNA聚合酶與相關基因的啟動子結合，完成的是轉錄過程，轉錄的產物是mRNA．（4）若用第一小問的3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗．之后將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，由于構建基因表達載體時，四環素抗性基因被破壞，因此能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是載體﹣載體連接物；若接種到含青霉素的培養基中，由于青霉素抗性基因沒有被破壞，因此能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物． 所以答案是：（1）載體﹣載體連接物 目的基因﹣目的基因連接物 標記 受體細胞中是否含有目的基因（2）mRNA（3）EcoRI和BamHI（4）載體﹣載體連接物 目的基因﹣載體連接物、載體﹣載體連接物
【考點精析】根據題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術的相關知識可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．