Question

【題目】科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療，其技術流程如圖1。圖2表示目的基因及限制酶切點，圖3表示質粒，據圖回答：

（1）重組細胞的細胞核來自______________細胞。

（2）將基因導入ES細胞而不是導入上皮細胞是因為ES細胞具有______________。

（3）步驟③，需要構建含有干擾素基因______________。

（4）從基因組數據庫中查詢干擾素基因的核苷酸序列，以便根據真訓練設計合成引物用于PCR擴增，PCR擴增過程至少第____________輪循環后才能獲得純目的基因片段（僅含引物之間的序列）。

（5）對于干擾素基因片段和質粒進行雙酶切時，可選用限制酶的組合為____________或____________。

（6）將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發___________色熒光的細胞進行體外誘導。為檢測干擾素基因是否表達，可以采用___________的方法。

Answer 1

【答案】（1）（干擾素基因缺失小鼠的）上皮細胞 （2）全能性 （3）基因表達載體

（4）3（2分） （5）HindIII和PstI EcoRI和PstI （6）綠 抗原—抗體雜交

【解析】

試題分析：：（1）重組細胞的細胞核來自上皮細胞

（2）將基因導入ES細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有全能性．

（3）步驟③是將目的基因導入ES細胞，該過程之前需要構建基因表達載體；

（4）因為前兩輪循環擴增產物上目的基因上都帶有模板DNA其他片段，即擴增產物比目的基因的DNA片段長，第三輪就有了純目的基因片段了

（5）由圖可知，SamⅠ酶的識別序列和切割位點位于目的基因上，用該酶切割會破壞目的基因，因此對干擾素基因片段和質粒進行酶切時，可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ

（6）用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時會破壞紅色熒光蛋白基因，但不會破壞綠色熒光蛋白基因，因此將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發綠色熒光的細胞進行體外誘導．為檢測干擾素基因是否表達，可以采用抗原-抗體雜交法