Question

【題目】圖（a）中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內切酶的識別序列與切割位點，圖（b）為某種表達載體示意圖（載體上的EcoR I、Sau3A I的切點是唯一的）。

根據基因工程的有關知識，回答下列問題：

（1）經BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被____________酶切后的產物連接，理由是____________。

（2）若某人利用圖（b）所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖（c）所示。這三種重組子中，不能在宿主細胞中表達目的基因產物的有____________，不能表達的原因是____________。

（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有____________和___________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是____________。

Answer 1

【答案】 Sau3A I 兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端 甲和丙 甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉錄 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 T4DNA 連接酶

【解析】試題分析：根據目的基因兩端的限制酶切點確定限制酶的種類

①應選擇切點位于目的基因兩端的限制酶；②不能選擇切點位于目的基因內部的限制酶；③為避免目的基因和質粒的自身環化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質粒，但要確保質粒上也有這兩種酶的切點。

（1）由于限制酶Sau3AⅠ與BamHⅠ切割后產生的片段具有相同的黏性末端，所以經BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3AⅠ酶切后的產物連接。

（2）啟動子是一段有特殊序列的DNA片段，它是RNA聚合酶識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質。終止子也是一段有特殊結構的DNA短片段，相當于一盞紅色信號燈，使轉錄在所需要的地方停止下來。在基因表達載體中，啟動子應位于目的基因的首端，終止子應位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能表達。而圖甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉錄，所以都不能表達目的基因的產物。

（3）常見的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。