Question

【題目】GDNF是一種神經營養因子，對損傷的神經細胞具有營養和保護作用。研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖1所示），并導入到大鼠神經干細胞中，用于干細胞基因治療的研究。請回答：

（1）在分離和培養大鼠神經干細胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是 。

（2）基因工程中最常用的載體是 。構建含GDNF基因的表達載體時，需選擇圖1中的 限制酶進行酶切。基因表達載體中必須有啟動子、 、 等三部分。

（3）經酶切后的載體和GDNF基因進行連接，連接產物經篩選得到的載體主要有三種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖1所示）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對篩選的載體進行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進行電泳分析，結果如圖2所示。圖中第 泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。

（4）將正向連接的表達載體導入神經干細胞的方法是 。當培養的神經干細胞達到一定的密度時，需進行 培養以得到更多數量的細胞。

（5）科學家使用轉基因動物生產藥物時通常將藥用蛋白基因與 等調控組件重組在一起導入哺乳動物的受精卵中，使轉基因動物通過分泌的乳汁來生產藥物，此轉基因動物被稱作 。

Answer 1

【答案】

（1）使細胞分散開

（2）質粒 XhoI 終止子 標記基因 目的基因

（3）②

（4）顯微注射技術 傳代

（5）乳腺蛋白基因的啟動子 乳腺生物反應器

【解析】

試題分析：

（1）動物細胞培養時，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶作用，使細胞分散開。

（2）質粒上有XhoⅠ識別位點，而且在啟動子之后，所以選用XhoⅠ限制酶進行酶切。

（3）泳道①僅有一種條帶，屬于載體自連；泳道②有兩種條帶，且長度分別與質粒和GDNF基因長度相同，為正向連接；泳道③有兩種條帶，長度與BamHⅠ酶切后結果相同，為反向連接。

（4）將目的基因導入動物受體細胞常用的方法是顯微注射技術，當細胞密度達到一定程度，需要進行分瓶，進行傳代培養。

（5）通常將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起導入哺乳動物的受精卵中，使轉基因動物通過分泌的乳汁來生產藥物，此轉基因動物被稱作乳腺生物反應器。